1 . 烟草是我国重要的经济作物，其栽培容易受到气候、土壤等诸多生态因子的强烈制约，因而烟草的栽培区域受到限制。土壤中的盐分是制约烟草生长的重要因素，它不仅造成烟草产量和品质降低，同时还使土壤板结。某科研团队为获得抗逆性强的抗盐烟草品种，将抗盐基因H与质粒重组，再借助农杆菌导入烟草细胞中。叶绿体是植物基因工程的理想受体，将外源基因整合到叶绿体DNA 中往往能够获得高效表达，由此发展出叶绿体基因工程。回答下列有关问题：
(1)基因工程的核心是___________，质粒作为基因工程的工具，应具备的基本条件有___________（答出2点即可）等。
(2)检测目的基因是否成功导入受体细胞的叶绿体时，实验组以待测的样本 DNA 为模板，使用目的基因的特异性引物进行PCR 技术扩增，利用PCR 技术扩增的前提条件是___________。
(3)转入叶绿体中的基因___________（填“会”或“不会”）随花粉传递给子代，理由是___________。
(4)若要获得抗盐能力更强的抗盐基因，可以对基因H进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程可以通过蛋白质工程完成，该过程的基本思路是：①___________、②设计抗盐蛋白质的结构、③___________、④找到对应的基因序列。

2 . 大引物PCR定点突变常用于研究蛋白质结构改变导致的功能变化。单核苷酸的定点诱变需要通过PCR获得，其过程如图所示。下列有关分析正确的是（       ）

A．向PCR体系中加入Mg2+能激活DNA聚合酶

B．PCR-I经过一次循环即可获得大引物模板

C．PCR-I得到的产物均作为PCR-Ⅱ的引物

D．PCR-Ⅱ选用大引物和引物乙以获得定点诱变的基因片段

3 . 蒂蛀虫是荔枝的重要害虫。科研人员培育转基因抗虫荔枝的过程如图1所示，SalⅠ、HindⅢ和BamHⅠ三种限制酶的切割位点在目的基因和Ti质粒上的位置已知。回答下列问题：

   

(1)Ti质粒是植物基因工程中常用的载体，图中Ti质粒上有两个标记基因，与具有一个标记基因的Ti质粒相比，其优点是______。导入重组质粒的农杆菌的生长特点为______，利用该特点可以将其筛选出来。
(2)科研人员采用了如图2所示的巢式PCR技术获取抗虫基因，巢式PCR是一种变异的聚合酶链式反应（PCR），使用两对PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物（也称外引物）扩增片段和普通PCR相似。第二对PCR引物称为巢式引物（因为其在第一次PCR扩增片段的内部，也称内引物），结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增的片段短于第一次扩增的。相比于常规PCR，巢式PCR获得的目标产物特异性更强。

   

①PCR扩增加入的缓冲液中含有Mg²⁺，其作用是______，在最后一个循环中通常还需要维持在72℃条件下5min，其目的是______。
②图2中由中间产物获得目标产物，至少需要经过______次变性。
(3)科研人员采用农杆菌转化法将抗虫基因导入荔枝细胞，运用植物组织培养技术培养得到的转基因植物有一部分不具有抗虫性状，经DNA分子杂交技术发现，这部分植物不含抗虫基因，原因可能是______（答出2点即可）。

4 . β-胡萝卜素可在人体内转化为维生素A，普通水稻胚乳细胞中不含β-胡萝卜素，科研人员利用基因工程技术培育富含β-胡萝卜素的第一代“黄金大米”。
(1)培育第一代“黄金大米”时，需要将八氢番茄红素合成酶（psy）基因和胡萝卜素脱饱和酶（crtI）基因家转入普通水稻，下图示所需构建的重组Ti质粒中的重组T-DNA片段。

①要租提取含psy基因、crtI基因的DNA时，利用了DNA分子的_____物理性质。
②利用PCR扩增psy基因、crtl基因时，需要通过控制_____的方法使DNA复制在体外反复进行。常采用_____来鉴定PCR产物。
③据图分析，构建重组T-DNA片段时，依次用限制酶_____和DNA连接酶处理，将psy基因和crtI基因、潮霉素抗性基因接入。
④通过农杆菌转化法，上述重组Ti质粒可以将该T-DNA片段导入水稻细胞并_____。psy基因和crtI基因导入水稻细胞并在细胞内维持稳定和表达的过程称为_____。
(2)已知潮霉素对原核细胞和真核细胞的生长都有抑制作用，据此分析重组T-DNA片段中接入潮霉素抗性基因的作用是_____。
(3)重组T-DNA片段中启动子_____是水稻种子的胚乳细胞特异性表达的启动子。
(4)检测水稻植株中crtI基因是否成功表达出胡萝卜素脱饱和酶可采用_____的方法。

5 . 瑞典科学家斯万特帕博凭借对已灭绝古人类基因组和人类进化的发现荣获2022年诺贝尔奖生理学或医学奖。他在研究过程中使用了大引物PCR构建定点突变，其过程如图。下列相关叙述正确的是（       ）

A．进行PCR扩增需要的酶有解旋酶和耐高温的DNA聚合酶

B．利用该技术将某功能蛋白的结构改变属于蛋白质工程

C．第二轮PCR所用的引物为第一轮PCR所产生的DNA的两条链

D．要完成两处位点的突变，至少需要设计4种引物

6 . 大肠杆菌经溶菌酶和洗涤剂处理后，拟核DNA就会缠绕在细胞壁碎片上，静置一段时间，质粒分布在上清液中，利用上述原理可初步获得质粒DNA。用三种限制酶处理提取的产物经PCR扩增，然后进行琼脂糖凝胶电泳，结果如图所示。下列关于质粒的粗提取和鉴定的叙述正确的是（       ）

A．在提取物中加入二苯胺试剂立即呈现蓝色可用来鉴定DNA

B．根据待分离DNA片段的大小，用凝胶载样缓冲液配制琼脂糖溶液

C．PCR时进行预变性的目的是增加大分子模板DNA彻底变性的概率

D．该质粒上一定有一个限制酶Ⅰ和Ⅱ的切割位点，有两个限制酶Ⅲ的切割位点

7 . F基因突变可引发人类某种单基因遗传病。以下图1为该遗传病的家系图谱，图2为用限制酶M处理家系成员的F基因后，进行电泳的部分结果。下列叙述不正确的是（       ）

A．环状DNA分子和链状DNA分子在凝胶中的迁移速率可能不同

B．该遗传病的遗传方式为伴X隐性遗传

C．用限制酶M处理家系成员的待测基因之前，应先对待测基因进行PCR

D．Ⅱ-2体内的待测基因序列中共存在三个限制酶M的酶切位点

8 . PCR具有操作简便、灵敏度高、特异性强、对原始材料的质量要求低等优点。PCR技术在分子生物学、医学、考古学、农业动植物检疫等许多领域得到了广泛应用。下列关于PCR的叙述，错误的是（       ）

A．模板双链DNA在解旋酶作用下解聚为单链DNA

B．延伸过程需在引物参与下形成新的DNA链

C．复性过程中两种引物通过碱基互补配对与单链DNA结合

D．PCR完成后常采用琼脂糖凝胶电泳来鉴定产物

9 . 常规PCR只能扩增两引物间的DNA区段，要扩增已知DNA序列两侧的未知DNA序列，可用反向PCR技术。反向PCR技术扩增的原理如下图所示。下列叙述错误的是（       ）

A．切割M和N时选用的限制酶可以相同，也可以不同

B．环化之后产生的DNA分子没有游离的磷酸基团

C．图中引物，应选择引物1和引物4，且二者间不能互补配对

D．PCR扩增，每轮循环前应加入限制酶将环状DNA切割成线状

10 . 利用PCR方法克隆水通道蛋白基因P。基因P的部分序列如下图，请从①~④中选择扩增P基因的合适引物组合是（　　）
5'—GAAGTCCTCT ----------------- ACGACGAACC—3'
3'—CTTCAGGAGA ----------------- TGCTGCTTGG— 5'
①5'—GAAGTCCTCT—3'②3'—TGCTGCTTGG—5'③3'—CTTCAGGAGA—5'④5'—ACGACGACC—3'

A．①③

B．①②

C．②③

D．②④