名校
1 . 酵母菌絮凝是指菌体细胞间通过细胞壁相互粘附、聚集成团的现象。适当提高酵母的絮凝能力,有助于发酵后细胞和产物的分离,节约生产成本。科研人员为研究R基因对酵母菌絮凝性能的影响,用基因工程技术获得了R基因被敲除的酵母菌菌株,主要步骤如图1(G418为一种氨基糖苷类抗生素)。据图回答:_____ 的识别序列,PCR获取R基因左右两端的N和C片段过程中,除图中条件外,还需提供_____ 等条件(至少写三个)。
(2)利用含_____ 的培养基筛选出重组酵母,再挑取单菌落进行PCR扩增,验证酵母细胞R基因是否被敲除,则扩增时选择引物组合是_____ 。
(3)科研人员继续将野生酵母菌和R基因敲除酵母菌的菌液接种到装有麦芽汁的锥形瓶中,一定条件下静置发酵7天,测定酒精发酵能力和絮凝能力,结果如下表。
①酒精发酵期间,每个锥形瓶应注意保持_____ 条件和定期排气。
②实验结果表明,R基因敲除酵母菌是否符合生产需求?请说出你的判断依据。_____ 。
(4)科研人员又将不同浓度梯度的R基因敲除酵母菌菌液和野生酵母菌菌液点样于含30g/mL钙荧光白(细胞壁抑制剂,破坏细胞壁的正常组装)的YPD培养基上,结果如图2.推测R基因敲除酵母菌絮凝能力变化的原因是_____ 。
(1)过程①,引物2和引物4分别添加了MluⅠ的识别序列,则引物1和引物3的5'端分别添加
(2)利用含
(3)科研人员继续将野生酵母菌和R基因敲除酵母菌的菌液接种到装有麦芽汁的锥形瓶中,一定条件下静置发酵7天,测定酒精发酵能力和絮凝能力,结果如下表。
指标种类 | 酒精发酵能力 | 絮凝能力 |
野生酵母菌 | 4.5% | 63.1% |
R基因敲除酵母菌 | 4.5% | 83.1% |
②实验结果表明,R基因敲除酵母菌是否符合生产需求?请说出你的判断依据。
(4)科研人员又将不同浓度梯度的R基因敲除酵母菌菌液和野生酵母菌菌液点样于含30g/mL钙荧光白(细胞壁抑制剂,破坏细胞壁的正常组装)的YPD培养基上,结果如图2.推测R基因敲除酵母菌絮凝能力变化的原因是
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2023-05-28更新
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277次组卷
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4卷引用:山东省济宁市一中2022-2023学年高二下学期期中生物试题
2 . 滁菊为菊科多年生草本植物,长期营养繁殖易造成病毒积累,导致滁菊花色劣变。某科研小组比较了3种脱毒方法对滁菊体内菊花B病毒(CVB)和菊花矮化类病毒(CSVd)脱除的效果,结果见下表;图是对不同试管苗进行RT-PCR(逆转录PCR)后的电泳示意图(引物根据CVB的基因序列设计)。( )
下列相关叙述正确的是( )
脱毒方法 | 样本存活数 | 脱除CSVd率 | 脱除CVB率 |
茎尖分生组织培养 | 77 | 20.78 | 44.16 |
热处理结合茎尖培养 | 71 | 36.62 | 63.38 |
病毒唑结合茎尖培养 | 71 | 46.48 | 49.30 |
A.RT-PCR技术中用到的酶有逆转录酶、DNA聚合酶 |
B.热处理、病毒唑处理后,试管苗存活率下降 |
C.试管苗2、5尚未脱毒成功,3、4已脱去CSVd和CVB病毒 |
D.只脱除CSVd病毒时,可选择热处理结合茎尖分生组织培养 |
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2023-05-23更新
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152次组卷
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2卷引用:山东省临沂市沂水县2022-2023学年高二下学期期中生物试题
名校
3 . 利用重叠延伸PCR技术进行定点突变,可以实现对纤维素酶基因的合理性改造,其过程如图所示。下列说法错误的是( )
A.产物AB是依赖引物a和引物b扩增的结果 |
B.引物c和引物b上均含有突变的碱基序列 |
C.①过程需要先加热至90°C以上后再冷却至50°C左右 |
D.②过程需要利用引物a和引物d获得突变产物AD |
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2023-05-23更新
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654次组卷
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4卷引用:山东省淄博市沂源县一中2022-2023学年高二4月期中生物试题
4 . 以下是将乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg导入巴斯德毕赤酵母菌生产乙肝疫苗的过程及有关资料:
资料1:巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒,所以改造出了图1所示的pPIC9K质粒[5'AOXI和3'AOXI(TT)分别是基因AOXI的启动子和终止子]用作载体,其与目的基因HBsAg形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组,将目的基因整合于染色体中已实现表达。
注意HBsAg基因中的白色箭头表示转录的方向
资料2:限制酶酶切位点
(1)用PCR技术扩增HBsAg基因时所需TaqDNA聚合酶需要___________ 激活。此过程中需要添加引物的原因是_________________ 。
(2)为实现HBsAg基因和pPIC9K质粒重组,设计引物时需要在引物的___________ 端添加相应限制酶的识别序列,则在HBsAg基因两侧的A和B位置添加的碱基序列分别是___________ 、___________ ,这样设计的优点是___________ 。
(3)酶切获取HBsAg基因后,需用___________ (填"EcoliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”)将其连接到pPIC9K质粒上,形成重组质粒,构建重组质粒的目的是___________ 。
(4)若用限制酶SnaBI,BglII联合酶切pPIC9K质粒,获得的DNA片段的长度分别是36kb,25kb,65kb;用限制酶BglII、AvrII联合酶切pPIC9K质粒,得到的DNA片段的长度分别是36kb,36kb、54kb;已知HBsAg基因长度是52kb。步骤3中应选用限制酶___________ 来切割重组质粒以获得重组DNA,切割后的重组DNA的长度是___________ 。
资料1:巴斯德毕赤酵母菌体内无天然质粒,所以改造出了图1所示的pPIC9K质粒[5'AOXI和3'AOXI(TT)分别是基因AOXI的启动子和终止子]用作载体,其与目的基因HBsAg形成的重组质粒经酶切后可以与酵母菌染色体发生同源重组,将目的基因整合于染色体中已实现表达。
注意HBsAg基因中的白色箭头表示转录的方向
资料2:限制酶酶切位点
限制酶 | SnaBI | AvrII | SacI | Bg1II |
识别序 列及酶 切位点 |
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(1)用PCR技术扩增HBsAg基因时所需TaqDNA聚合酶需要
(2)为实现HBsAg基因和pPIC9K质粒重组,设计引物时需要在引物的
(3)酶切获取HBsAg基因后,需用
(4)若用限制酶SnaBI,BglII联合酶切pPIC9K质粒,获得的DNA片段的长度分别是36kb,25kb,65kb;用限制酶BglII、AvrII联合酶切pPIC9K质粒,得到的DNA片段的长度分别是36kb,36kb、54kb;已知HBsAg基因长度是52kb。步骤3中应选用限制酶
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5 . 人乳铁蛋白(hLF)对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究,主要流程如图。图中AseI、NheI、SalI、BamHI代表相关限制酶切点,neor为新霉素抗性基因,BLG基因为B乳球蛋白基因,GFP基因为绿色荧光蛋白基因。
(1)过程①所需要的酶是______ ,该过程不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT-PCR,原因是_______ 。
(2)为便于hLF基因插入pEB质粒中,需在引物的_______ 端添加______ 两种限制酶的识别序列。
(3)若利用PCR技术扩增某基因片段时消耗了62个引物分子,则该过程扩增了_____ 次。过程②中,hLF基因插入到BLG基因之后的目的是______ 。
(4)将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养,再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中_____ ,以便筛选出转染成功的细胞。
(1)过程①所需要的酶是
(2)为便于hLF基因插入pEB质粒中,需在引物的
(3)若利用PCR技术扩增某基因片段时消耗了62个引物分子,则该过程扩增了
(4)将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养,再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞中
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名校
6 . 如图是被农杆菌侵染的水稻植株的DNA片段,研究者将其连接成环,并以此环为模板进行PCR,扩增出T—DNA插入位置两侧的未知序列,据此来确定T—DNA插入的具体位置。有关说法正确的是( )
A.农杆菌在自然条件下主要侵染单子叶植物和裸子植物,T—DNA存在于其Ti质粒上 |
B.若扩增循环n次,需要个引物 |
C.利用图中的引物②③组合可扩增出两侧的未知序列 |
D.将扩增出的未知序列与水稻基因组序列比对可确定T—DNA的插入位置 |
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2023-05-19更新
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623次组卷
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8卷引用:山东省济宁市泗水县2022-2023学年高二下学期期中生物试题
山东省济宁市泗水县2022-2023学年高二下学期期中生物试题专题03 基因工程-【好题汇编】备战2023-2024学年高二生物下学期期中真题分类汇编(山东专用)辽宁省辽宁师范大学附属中学、丹东二中、抚顺二中、本溪高中、盘锦高中、辽油一高2020-2021学年高二下学期期中生物试题山东省淄博市临淄中学2023—2024学年高二下学期4月考试生物试题福建省福州市福州八县一中2023-2024学年高二下学期4月期中生物试题辽宁省大连市滨城高中联盟2023-2024学年高二下学期期中考试生物试卷天津市四校(杨柳青一中、咸水沽一中 、四十七中,一百中学)2020-2021学年高二下学期期末联考生物试题专题05 基因工程-【好题汇编】备战2023-2024学年高二生物下学期期中真题分类汇编(人教版2019选择性必修3)
名校
7 . 某研究小组通过新冠病毒基因组的特定基因制备疫苗,选择了SARS-Cov-2的S蛋白基因。利用基因工程的方法将S蛋白基因的重组质粒导入CHO细胞(从中国仓鼠的卵巢细胞中得到),然后在发酵罐内大量培养,在体外表达出S蛋白,经步步去杂,获得较纯抗原,加以氢氧化铝佐剂进行吸附,再使用西林瓶预灌封,从而实现疫苗的生产。
(1)从GenBank中获得了S蛋白基因的全部基因序列,逆转录获得了cDNA,其两端的核苷酸序列如下图所示。利用PCR技术扩增S蛋白基因的引物需满足的条件是______ ,所以其碱基序列分别是_______ (假设引物为单链DNA)。
5' AT GT TTG TTTT………………… ATTACACATA A 3'
3' TACA AAC AAAA………………TA ATGTGTATT 5' S蛋白基因cDNA序列
(2)PCR扩增产物的电泳结果显示,除目的基因条带外,还有非特异性条带,从引物的角度考虑可能的原因是_________ 。为避免上述现象出现, 用于PCR的引物通常为_______ 个核苷酸。为了便于将扩增的DNA片段与载体连接, 可在引物的_________ 端加上限制酶识别序列。
(3)将S蛋白基因表达载体导入CHO细胞的方法是________ ,导入过程完成24h后,使用荧光显微镜可以在紫外光下观察到细胞培养基中细胞绿色荧光,但仍不能说明导入CHO细胞的都是S蛋白基因表达载体,依据是_____ 。
(4)临床试验阶段,可选用恒河猴作为实验对象,检测重组蛋白疫苗的预防效果。疫苗通常需要注射两针,免疫间隔2周,抗体大约在两周后产生。现有健康的恒河猴20只、重组蛋白疫苗、安慰剂(除不含重组蛋白疫苗外,其余成分与重组蛋白疫苗溶液相同),请依据上述实验材料及试剂写出实验思路及预期实验结果。
实验思路:_________ 。
预期实验结果:______ 。
(1)从GenBank中获得了S蛋白基因的全部基因序列,逆转录获得了cDNA,其两端的核苷酸序列如下图所示。利用PCR技术扩增S蛋白基因的引物需满足的条件是
5' AT GT TTG TTTT………………… ATTACACATA A 3'
3' TACA AAC AAAA………………TA ATGTGTATT 5' S蛋白基因cDNA序列
(2)PCR扩增产物的电泳结果显示,除目的基因条带外,还有非特异性条带,从引物的角度考虑可能的原因是
(3)将S蛋白基因表达载体导入CHO细胞的方法是
(4)临床试验阶段,可选用恒河猴作为实验对象,检测重组蛋白疫苗的预防效果。疫苗通常需要注射两针,免疫间隔2周,抗体大约在两周后产生。现有健康的恒河猴20只、重组蛋白疫苗、安慰剂(除不含重组蛋白疫苗外,其余成分与重组蛋白疫苗溶液相同),请依据上述实验材料及试剂写出实验思路及预期实验结果。
实验思路:
预期实验结果:
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8 . PCR技术的实用性和极强的生命力其使成为生物科学研究的一种重要方法,极大地推动了分子生物学以及生物技术产业的发展。下面是两个具体实验中的PCR技术应用,请根据资料回答下列问题:
(1)重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板,通过多次PCR扩增,从而获得目的基因的方法。利用该技术可以实现基因的定点诱变。它在需要诱变的位置合成两个带有变异基因碱基的互补引物,然后分别与引物a和引物d做PCR,这样得到的两个PCR引物产物都带有变异基因,并且彼此重叠,再将重叠部位进行重组PCR就能得到诱变PCR产物,如图所示:___________ ,大量扩增突变产物AD则应选择引物___________ ,重叠延伸时不需要引物的原因___________ 。
②重叠延伸PCR通过___________ 实现定点突变。PCR1和PCR2需要分别进行的原因是___________ 。
③若正常基因可被限制酶DpnI识别并切割,特定位点突变后的基因不能被DpnI识别,请设计实验思路鉴定上述过程获得的突变产物AD是否为突变基因:___________ 。
(2)反向PCR可用于扩增未知序列,其原理如下图所示。下图链状DNA分子内侧是已知序列,外侧为未知序列。___________ 。
②图3中环状DNA进行PCR的过程中,沿引物A延伸子链的延伸方向是___________ (填“顺时针”或“逆时针”),PCR产物___________ (填“含有”或“不含”)EcoRI的酶切位点。
(1)重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板,通过多次PCR扩增,从而获得目的基因的方法。利用该技术可以实现基因的定点诱变。它在需要诱变的位置合成两个带有变异基因碱基的互补引物,然后分别与引物a和引物d做PCR,这样得到的两个PCR引物产物都带有变异基因,并且彼此重叠,再将重叠部位进行重组PCR就能得到诱变PCR产物,如图所示:
①PCR扩增DNA的过程中,引物a、b、c、d中,PCRI应选择图1中引物
②重叠延伸PCR通过
③若正常基因可被限制酶DpnI识别并切割,特定位点突变后的基因不能被DpnI识别,请设计实验思路鉴定上述过程获得的突变产物AD是否为突变基因:
(2)反向PCR可用于扩增未知序列,其原理如下图所示。下图链状DNA分子内侧是已知序列,外侧为未知序列。
①不直接在图2中DNA分子的两端设计引物并进行扩增,原因是
②图3中环状DNA进行PCR的过程中,沿引物A延伸子链的延伸方向是
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2023-05-16更新
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565次组卷
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2卷引用:山东省临沂市沂水县2022-2023学年高二下学期期中生物试题
9 . 常用不对称PCR来制备单链DNA分子探针。不对称PCR中使用的一对引物的量不相等,其中少的称为限制性引物,多的称为非限制性引物,开始扩增出的是双链DNA,后来扩增出了单链DNA。图中,α链为所需的DNA分子探针,已知图示DNA有m个,前10次循环的产物为双链DNA,后10次循环的产物是单链DNA,下列有关此过程的说法正确的是( )
A.DNA聚合酶从引物的5'端开始连接脱氧核苷酸 |
B.引物Ⅰ是非限制性引物,引物Ⅳ是限制性引物 |
C.此过程需要非限制性引物个数为(11×210-1)m |
D.此过程最终获得所需单链探针个数为10m×210 |
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2023-05-16更新
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419次组卷
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2卷引用:山东省临沂市沂水县2022-2023学年高二下学期期中生物试题
10 . 为探究Bcl-2相关抗凋亡蛋白3(BAG3)在细胞自噬中的作用,科研人员计划从质粒A中获取BAG3基因,将其接入质粒pGEX-4T1,然后在宿主细胞内表达目标蛋白,用于后续研究(如图1所示),BAG3的基因序列如图2所示。由于BAG3基因两侧没有合适的酶切位点,并确定内部不含有EcoRI,Xho1限制酶的识别序列。在设计引物时,需将引物与限制酶的识别序列相连,以便将目的基因与载体相连。设计出的引物是( )
A.引物5'-TTGAATTCATGAGCGCCGCCACCCACTC-3' |
B.引物5'-TTGAATTCTACTCGCGGCGGTGGGTGAG-3' |
C.引物5'-TAGAGCTCCGGTGCTGCTGGGTTACCAC-3' |
D.引物5'-TACTCGAGCGGTGCTGCTGGGTTACCAG-3' |
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255次组卷
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2卷引用:山东省临沂市沂水县2022-2023学年高二下学期期中生物试题