47. 将几丁质酶基因导入棉花细胞中,可获得抗真菌的转基因棉,其过程如下图所示(注:农杆菌中Ti质粒上只有T-DNA片段能转移到植物细胞中)。
(1) 图中基因工程的基本过程可以概括为“四步曲”,其中的核心步骤是
__________________。
(2)构建重组Ti质粒用到的工具酶是
___________________。
(3) 该几丁质酶在温度较高时易失去活性,科学家对编码几丁质酶的基因进行了改造,使其表达的几丁质酶的第3位的异亮氨酸变为半胱氨酸,在该半胱氨酸与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键,提高了其耐热性。资料中的技术属于
__________________工程范畴,其基本途径是从预期蛋白质的功能出发,通过
__________________和人工合成的方法获得该基因,再经表达、纯化获得蛋白质。
(4)检验转基因棉的抗菌性状,常用方法是
___________________________。
(5)除了图中所示的将目的基因导入受体细胞的方法,还可用
_______________或
____________方法。
(6)棉花细胞经③④⑤得到试管苗,依据的理论基础是
______________________。