1 . 重组PCR 技术是一项新的PCR技术，可将原来两个不相关的DNA 连接起来，成为一个新的分子。实验小组从猪源大肠杆菌中扩增得到LTB基因和ST1 基因片段，用重组PCR 技术构建了LTB-ST1 融合基因，融合基因的制备过程如图所示。下列相关分析正确的是（       ）

A．PCR 实验中，离心管、缓冲液和蒸馏水使用前要进行消毒

B．在设计引物时，P1、P2和P3的部分碱基都能互补配对

C．得到的多个杂交链都能作为模板用来延伸子链，以扩增融合基因

D．由杂交链延伸生成融合基因的过程中，不需要再另外添加引物

2 . 磷脂酸（PA）是调节植物生长发育和逆境响应的重要信使物质。为了解植物细胞中PA的动态变化，研究人员用无缝克隆技术将高度专一的PA结合蛋白（PABD）基因与绿色荧光蛋白（GFP）基因融合，构建有效监测细胞PA变化的荧光探针，并测定拟南芥细胞内PA含量。无缝克隆技术连接DNA片段的机理和构建荧光探针表达载体的过程如下图，请回答：

   

注：bar为草胺膦抗性基因；Kan^r为卡那霉素抗性基因。
(1)无缝克隆时，T5核酸外切酶沿___（填“5'→3'”或“3'→5'”）的方向水解DNA，形成黏性末端。T5核酸外切酶催化的最适温度为37°C，而过程①选择的温度为50°C，目的是___。
(2)过程②两个片段复性后存在“缺口”，因此过程③所需的酶有___。
(3)PCR技术中通常要设计引物，引物的作用是___，有时需要在引物的一端增加限制酶酶切位点，目的通常是___。PCR扩增PABD基因时需依据PABD基因一端的核苷酸序列和载体一端的核苷酸序列设计引物R1。据图分析扩增目的基因片段时，所用的引物F1和R2可对应下表中的___（填序号）。

①	5'-TCCGGACTCAGATCTCGAGC-3'
②	5'-AGCTATAGTTCTAGATCTAGATTAACTAGTCTTAGTGGCGTC-3'
③	5'-TATCGATGGCGCCAGCTGAGGATGGTGAGCAAGGGCGA-3'
④	5'GCTCGAGATCTGAGTCCGGACTTGTACAGCTCGTCCA-3'

(4)利用农杆菌花序侵染法转化拟南芥，将获得的种子进行表面消毒，均匀铺在含___的MS培养基上进行筛选和鉴定，将筛选得到的种子种植可得到转基因拟南芥，通过观测转基因拟南芥根尖细胞中___，了解PA的分布和含量。

3 . 顺铂是一种抗肿瘤药，普遍用于肺癌等癌症的化疗，但长期使用会使癌细胞产生耐药性。科研人员研究了miRNA、糖酵解与乳腺癌细胞（MCF7）耐药性之间的关系。请完成下列问题：
(1)某些肿瘤细胞即使在氧气充足的条件下，也主要通过糖酵解产生ATP，被称为有氧糖酵解（产物是乳酸）。而在氧气充足的条件下，正常细胞主要是通过有氧呼吸第________阶段产生ATP。
(2)为获得耐药性较强的MCF7细胞，可在培养MCF7的培养液中加入顺铂，当存活的细胞达到一定数量后，用___________处理并传代培养。每次传代时，再增加培养液中顺铂的剂量。
(3)检测MCF7耐药株与非耐药株在顺铂处理后的乳酸产量，结果如下图1所示。可见耐药株的有氧糖酵解强度____________非耐药株。

(4)研究发现，耐药株中有一种可与靶基因的mRNA结合的miRNA（miR-485-5p）的含量明显低于非耐药株。为研究miR-485-5p与M基因的关系，研究人员在MCF7细胞中过表达或敲低miR-485-5p后，电泳分离细胞裂解物，用抗M蛋白抗体检测，结果如下图2，说明miR-485-5p能够____________（填“抑制”或“促进”）M基因的表达，理由是____________。

(5)在MCF7细胞中过表达或敲低M基因后，检测乳酸产量，结果如图3所示，说明过表达M基因时非耐药株对顺铂的抗性增强，敲低M基因时耐药株对顺铂的抗性减弱。综合上述研究结果，miRNA引起MCF7产生耐药性的机制是________________。

4 . 某自花传粉、雌雄同株的植物有野生型和突变型两种类型，该植物的染色体组成如下图所示，抗倒伏基因D位于突变型的4号染色体上，易染条锈病基因T位于突变型的8号染色体上，野生型相应染色体上分布着隐性基因d、t。将野生型和纯合突变型杂交得到F₁，F₁自交得到F₂，统计并检测F₂的基因型及相应基因型的个体数目，得到下表所示的结果。请回答下列相关问题：

基因型	DD	Dd	dd	TT	Tt	tt
相应基因型数目	507	1028	498	340	1362	1021

(1)为建立该植物的基因组数据库，需完成____________条染色体的DNA测序。突变体4号和8号染色体上D、T基因的出现是________________的结果。
(2)F₁自交，F₂中既抗倒伏又抗条锈病植株的比例为____________。
(3)研究人员发现易染条锈病基因的遗传结果与理论值有显著差异。经重复实验，发现基因型TT、Tt、tt的个体数量之比与表中的数据基本一致。为解释这一现象，研究人员从雌雄配子活性的角度提出了一种假说——雌配子活性均正常，但含________（填“T”或“t”）基因的雄配子成活率为________，含另一等位基因的雄配子活性正常。
(4)现有野生型、突变型、F₁植株若干，试设计一代杂交实验验证上述假说，并预测相应的子代表型及比例。
杂交方案：________________
预测结果：________

5 . 根据下述材料，下列相关说法错误的是（       ）
材料一：2019年10月，诺贝尔生理医学奖授予了三位细胞氧感应机制发现者，他们研究发现，当细胞缺氧时，缺氧诱导因子（HIF-1a）与芳香烃受体核转位蛋白（ARNT）结合，调节基因的表达生成促红细胞生成素（EPO）。EPO是一种糖蛋白类激素，可作用于骨髓造血组织，促进红细胞生成，改善缺氧。当氧气充足时，HIF-1a羟基化后被蛋白酶降解（参见下图）。这一革命性的发现为抗击贫血、癌症和许多其他疾病提供了思路。
材料二：为适应不同水体的溶氧环境，鱼类的生理、生化以及组织器官形态结构发生了相应改变。鲫鱼在低温、低氧条件下可以生存数月，此时鲫鱼进行无氧代谢，将产生的乳酸直接转化为酒精分泌到水中；肺鱼在河水干涸时，利用身上的黏液粘住泥土，形成特殊的“鱼茧”，进入休眠状态，肺鱼借“鱼茧”顶端的小孔与外界相通，完全靠鳔呼吸，可生存数月之久。

A．人体长时间剧烈运动时，细胞中HIF-1a的含量会升高

B．生活在高原地区的人细胞内，催化HIF-1a合成的酶活性可能比低海拔地区的人低

C．改变代谢方式和代谢途径是鱼类适应低氧环境的策略之一

D．农业生产中化肥的大量施用以及生活、工业污水的排放等都会造成低氧环境

6 . 透明质酸是一种应用广泛的粘性多糖，研究者欲改造枯草芽孢杆菌，通过添加诱导型启动子来协调菌体生长与产物生产之间的关系。
(1)为通过外源添加诱导剂来控制基因的表达，研究者选择了含木糖诱导型启动子的p质粒，其中EcoRV酶切位点的识别序列为5'-GATATC-3'，Xbal酶切位点的识别序列为5'-TCTAGA-3'。透明质酸合成酶基因H以a链为转录模板链。利用PCR扩增H基因时，需要在引物的5'端添加限制酶识别序列。为了使图1中酶切后的H基因按照正确的方向与p质粒连接，依据图中已知碱基序列，PCR引物的碱基序列为_____。   
(2)为协调菌体生长与产物生产之间的关系，将构建好的重组质粒转入经_____处理后的枯草芽孢杆菌（D菌），在含_____的培养基上筛选，得到枯草芽孢杆菌E（E菌）。对E菌进行工业培养时，培养基应先以蔗糖为唯一碳源，接种2小时后添加_____，以诱导E菌产生更多的透明质酸。
(3)外源质粒在细菌细胞中遗传不稳定、易丢失，研究者尝试将重组质粒进行改造，利用同源区段交叉互换的方法将H基因插入枯草芽孢杆菌D的基因组mpr位点，得到整合型枯草芽孢杆菌F（F菌）。请在图2方框中画出F菌的基因组_____。

(4)对三种枯草芽孢杆菌进行培养，结果如图3。结合上述研究，请选择适宜工业发酵生产的菌种并阐明理由_____。

7 . 研究者在秦岭地区发现了棕色大熊猫。

      

(1)研究者研究了三个大熊猫家系，如图1所示（Qizai和Dandan为棕色），据此推测大熊猫棕色的遗传方式最可能是_____。（不考虑XY同源区段）
(2)为进一步研究熊猫毛色的差异，对黑色和棕色毛发进行了显微观察，结果如图2。据图分析，大熊猫毛色差异的原因是_____。
(3)研究者发现B基因的外显子1发生的25个碱基对的缺失可能与毛色变异有关。B基因相应的mRNA序列见图3。

   

据图分析，25个碱基对的缺失导致毛色变异的可能原因是_____。
(4)黑色素主要沉积在淀粉样蛋白上，B蛋白的作用可能与PMEL水解生成淀粉样蛋白有关，图4显示淀粉样蛋白的生成过程。为进一步研究B基因影响熊猫毛色的机理，研究者设计了下列实验：

   

注：在检测蛋白的表达水平变化时常用内参蛋白来做参照物
①向黑色素瘤细胞中导入一小段RNA，干扰B基因的_____过程导致细胞内B蛋白含量仅为正常细胞的25%。
②通过蛋白质电泳与抗原—抗体杂交技术检测PMEL切割后的片段，部分结果如图5。B蛋白在PMEL上的作用位点是_____（填“a”或“b”或“c”或“d”），做出此判断的依据是_____。
(5)综合以上研究概述B基因突变影响熊猫毛色的机理_____。

8 . 糖皮质激素（GC）是肾上腺皮质分泌的类固醇激素，正常生理条件下，血液中糖皮质激素水平很稳定。应激可刺激下丘脑—垂体一肾上腺轴（HPA）调控肾上腺皮质分泌GC，在应激反应中GC可通过抑制细胞因子释放、诱导细胞凋亡等途径，调控免疫系统的功能，调控过程如图所示。回答下列问题：

(1)情绪是大脑的高级功能之一，大脑还具有的高级功能是_____（答出3种）。长期的紧张、焦虑情绪会导致下丘脑分泌CRH作用于垂体，但不能直接作用于肾上腺皮质，这是由于_____。
(2)GC能源源不断地合成，但内环境中GC含量却能保持相对稳定，其原因有_____（答出2点）
(3)器官移植时，可使用适量GC以提高成功率，其原理是_____。
(4)除HPA轴之外还存在另一种免疫调节机制：“脑一脾神经轴”，结合下图及体液免疫过程分析，促进B细胞分化的两个刺激信号为_____。研究发现，去除脾神经的小鼠在接种新冠疫苗后，浆细胞的数量显著减少，可能的原因是_____。

(5)胆碱类受体是脑一脾神经通路中介导B细胞分化的重要结构。利用以下实验材料及用具，设计实验证明小鼠B细胞缺少胆碱类受体导致体液免疫能力降低。请完成下表。
实验材料及用具：生理状况相同的小鼠若干只、正常造血干细胞、异常（不能编码胆碱类受体的）造血干细胞、X抗原、注射器、抗体定量检测仪器等。

简要操作步骤	实验步骤的目的
去除小鼠造血干细胞	获得不能产生B细胞的小鼠
①_____	设置对照组
②_____	设置实验组
对照组和实验组均测定多只小鼠	减少实验误差
抗体定量检测仪器测定	测定两组小鼠的抗X抗原的抗体产生量

10 . 家蚕的性别决定方式是ZW型，蚕蛾触角节数的类型有多节数、中节数、少节数，分别受复等位基因D₁、D₂、D₃控制。研究人员让多节雄性和中节雌性杂交，F₁表型及比例为多节雌性∶多节雄性∶中节雄性∶少节雌性=1∶1∶1∶1。下列叙述错误的是（　　）

A．D1、D2、D3基因位于Z染色体，种群中雄蚕的基因型有6种

B．D1、D2、D3基因的遗传遵循分离定律，显隐性关系为D1>D2>D3

C．D1、D2、D3基因的形成体现了基因突变的不定向性

D．F1雌、雄蚕随机交配，F2雌蚕中D1的基因频率为1/8