1 . 喹啉是一种典型的含氨杂环污染物，广泛存在于焦化废水中，具有致畸、致癌、致突变作用，易通过水体污染环境。为高效处理喹啉污染，科研人员通过对焦化废水处理厂的活性污泥进行逐级驯化，筛选出高效喹啉降解复合菌群，实现含喹啉废水的高效工业化处理。图1为构建过程示意图，请回答下列问题：

(1)富集培养基的成分有胰蛋白胨10g、NaCl10g、酵母粉5g、蒸馏水1000mL，其中属于氮源的有___。将富集培养基的pH调整到7.0，应在___操作前。过程①将污泥样品接种至富集培养基中30℃、200r·min^-1摇床振荡培养7d，摇床振荡培养有利于___，进而促进菌群的生长。
(2)过程②中，逐级提高无机盐培养基中喹啉浓度的目的是___。从用途角度分析，无氮无机盐培养基属于___培养基。
(3)过程④的接种工具为___。在统计甲上的菌落时，需每隔24h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，以免___。
(4)过程⑤接种的方法为___。与③中培养基相比，乙平板的培养基需添加的物质为___。
(5)图2为复合菌群对不同浓度喹啉降解曲线。据图分析，该复合菌群降解喹啉的最高水平浓度为___。喹啉的代谢涉及一系列的代谢过程，单菌降解喹啉最高水平为700mg·L^-1（48h），复合菌群具有更佳降解效果的原因可能有___；不同菌种的培养条件存在差异，为进一步提高复合菌群的降解效率，后续实验可探究___等对菌群降解效率的影响。

8 . 新霉素磷酸转移酶基因（neo）是转基因动物中常用的标记基因，但neo存在于动物细胞中会影响动物体生长和发育。为实现在敲除目的基因后，将neo基因从基因组中敲除，科研人员构建了基于Cre-loxP重组系统的通用型基因打靶载体，并转染小鼠受精卵获得了Flox工具鼠。图1为loxP序列的结构示意图，图2为Cre-loxP重组系统的作用机理示意图，图3为通用型基因打靶载体的构建及Flox鼠建立过程示意图。请回答下列问题：

   

(1)loxP位点是一段长为34bp的序列，具有方向性，结合图1，推测其方向性由区段___________决定。Cre酶可同时识别2个loxP位点的a和c区段，并同时催化b区段箭头处___________键水解。
(2)据图2分析，若同一个DNA分子上具有2个同向的loxP位点，经Cre酶作用后会得到一条链状DNA分子和一个环状DNA分子，从作用结果分析，Cre酶同时具有类似___________酶的作用；同一个DNA分子上具有2个反向的loxP位点，Cre酶仅能导致2个loxP位点间的序列反转连接，不能产生环状DNA分子，原因是______________________。
(3)图3中，过程①可在限制酶和DNA连接酶等作用下，将同源臂1和同源臂2插入pAT质粒中的多克隆位点序列MCS中。作为通用型载体，pAT质粒的MCS中含有多个在基因组（待敲除基因所在DNA）中出现频率较低的酶切位点，其意义是____________。
(4)两段存在同源序列（如同源臂）的DNA片段在重组酶的催化下，可发生同源重组，同源臂间的DNA序列可发生交换。为敲除特定基因，以待敲除基因两端的短小序列为依据设计引物，经PCR₁和PCR₂获得同源臂1和同源臂2，PCR₁和PCR₂不能在同一反应体系中进行的原因是_________________；为将同源臂定向插入pAT的MCS中，设计引物时需要在引物的___________端添加相应的限制酶切位点。
(5)过程②为重组pAT质粒转染小鼠受精卵的过程，该过程通常采用___________法。过程③需将转染后的受精卵置于适宜培养液中，培养24h后，能存活的胚胎为成功转染并整合到染色体DNA上的胚胎，后续通过___________等技术获得Flox小鼠。
(6)Flox小鼠中存在的neo基因，其两侧的2个LoxP位点的方向是___________的，可利用Cre酶将其敲除，获得不含neo基因的基因敲除鼠。为实现在特定的时间对特定细胞中的neo基因进行敲除，可在Cre基因的cDNA一段添加___________实现。

9 . 研究发现，长期处于过度紧张、焦虑等应激状态下易引起血糖升高进而导致2型糖尿病的发生，部分机理如下图，其中CORT（皮质醇，一种肾上腺糖皮质激素）与Ins（胰岛素）会竞争性结合InsR（胰岛素受体），使胰岛素敏感性降低。回答下列问题。

   

(1)过度紧张、焦虑时，机体经________（调节方式）调控胰岛素的分泌，胰岛素作用于肝细胞后，“？”处的生理效应是________。
(2)图中激素a为________，与CORT共同作用的靶器官是________。交感神经兴奋使肠道L细胞膜内外电位表现为________。
(3)据图分析，处于过度紧张、焦虑等应激状态下血糖升高，一方面机体经________轴促进CORT的分泌，使胰岛素敏感性降低；另一方面交感神经兴奋使________，从而直接或间接引起胰岛素分泌减少，导致血糖升高，诱发2型糖尿病。
(4)研究发现，糖尿病脑病是由于大脑海马组织中神经细胞长期暴露在高糖环境中引起细胞凋亡所致，其部分信号通路如下图，其中IKKs、NF—xB、Klotho（一种抗衰老蛋白）和PRX2（一种抗氧化蛋白）均为细胞内蛋白质。利拉鲁肽（一种GLP-1受体激动剂，与受体结合后的信号转导与高血糖刺激相似）对糖尿病脑病具有一定的改善作用，为探究其作用机理，进行了相关实验，结果如下表。

   

组别	实验动物	皮下注射处 理（400μg·kg-1·d-1，持 续8周）	8周后蛋白质的相对表达量 （蛋白质的相对表达量=相关 蛋白质的表达量/β—Actin蛋白的表达量）
			IKKs	NF-xB	Klotho	PRX2
1	正常大鼠	生理盐水	0.39	1.0	0.45	0.36
2	糖尿病脑病大鼠	生理盐水	0.76	2.8	0.23	0.43
3	糖尿病脑病大鼠	利拉鲁肽	0.58	1.6	0.53	0.58

①图中，高糖应激下经过程A、B会进一步加剧炎症，加速神经细胞的凋亡，这种调节机制为________。
②实验中，计算蛋白质的相对表达量时以β-Actin蛋白作为参照，原因是________。与组别1相比，组别2中PRX2表达量升高的原因是________，组别3中PRX2表达量升高是因为________。
(5)综上研究，利拉鲁肽对糖尿病脑病具有一定的改善作用，其机理是________。

10 . 2月29日为国际罕见病日。甲基丙二酸血症（MMA）是一种有机酸血症，主要是由于甲基丙二酰辅酶A变位酶（MCM）自身缺陷导致旁路代谢增强、有机酸积累引起，由等位基因A、a控制，发病率约为1/250000。图1为MCM在正常机体细胞内所发生的部分代谢过程。XLI是人类另一种较罕见的鱼鳞病分型，由等位基因T、t控制，在男性群体中发病率约为1/2000。图2是某家系的遗传系谱，其中Ⅰ-2不携带MMA和XLI相关的致病基因。请回答下列问题：

(1)分析图1，引起MMA的原因除了MCM自身缺陷外，还包括___。MCM参与的生理反应发生在机体细胞的___（填具体场所）。推测MMA的患病机理是___。
(2)分析图2，XLI的遗传方式为___，正常女性中携带者概率为___。相比于XL1，MMA的遗传特点是___。
(3)Ⅰ-1的基因型为___。ⅠI-2与IⅠ-3再生育一个女孩，患病概率为___。
(4)MMA临床表型及基因型复杂，至今已发现7种致病变异基因，其中由MUT基因突变致病称为单纯型MMA。图3为部分成员体细胞MUT基因测序结果：

①据图3判断，造成IⅠ-5、Ⅱ-6的MUT基因突变的原因分别是碱基对的___；②IⅠ-5、Ⅱ-6再生一个未患病孩子其MUT基因序列可能是___。

a．

b．

c．

d．

(5)MMA在各年龄段均可发病，多数见于新生儿期，常引起肝、肾、脑等多脏器损伤。结合以上分析，提出临床治疗的思路___。