2 . 毕赤酵母（能以甲醇为唯一碳源）可作为生产抗原蛋白的工程菌。研究人员以图所示质粒为载体，构建含乙型肝炎病毒表面抗原蛋白（HBsAg）基因的重组质粒，将重组质粒导入大肠杆菌中进行扩增，再经酶切后导入毕赤酵母，经同源重组整合到其染色体DNA上。请回答下列问题：

(1)启动子是_____________酶识别和结合的位点；组成HBsAg的基本单位是_____________。
(2)已知HBsAg基因的b链的序列为：5'-ATCTACGCGCTCATCCG……CGCAGCAATGAGTAGCG-3'。利用PCR技术获取HBsAg基因时，引物A结合的单链是_____________（填“a链”或“b链”）。某同学设计了如下的4种引物，其中可选用的引物组合是_____________。
A．5'-CGGATGAGCGCGTAGATGGATCC-3'       
B．5'-GGATCCATCTACGCGCTCATCCG-3'
C．5'-CGCAGCAATGAGTAGCGGGGCCC-3'       
D．5'-CCCGGGCGCTACTCATTGCTGCG-3'
(3)科研人员构建HBsAg基因表达载体时，应选用_____________酶对质粒进行酶切处理，并使用E.coliDNA连接酶将扩增后的HBsAg基因正确插入图所示质粒。将重组载体导入大肠杆菌时，应在含有_____________的培养基上进行筛选。欲从大肠杆菌中提取DNA，需向含DNA的滤液中加入预冷的酒精溶液后进行离心，取_____________（填“上清液”或“沉淀物”）即获得大肠杆菌的DNA，将重组质粒导入大肠杆菌的目的是_____________。
(4)转化的酵母菌在培养基上培养时，需向其中加入甲醇，其目的是_____________。

4 . 白地霉侵染是导致柑橘酸腐病的主要原因，实验证明桔梅奇酵母对白地霉具有生物防治能力。已知铁是真菌生长的必需元素，是胞内重要酶活性中心的组成部分。普切明酸是桔梅奇酵母产生的一种水溶性铁螯合剂，能快速在培养基中扩散并与其中的Fe³⁺形成稳定红色复合物。研究配制的含有不同浓度FeCl₃的培养基如下表所示。实验结果为桔梅奇酵母菌落周围出现红色抑菌圈，随FeCl₃浓度增大，抑菌圈红色加深但变窄，如下图所示。相关叙述正确的是（       ）

成分	MgSO4	NaH2PO4	蛋白胨	FeCl3溶液	水	琼脂
用量	5g	7g	15g	500mL	7g	20g

A．实验中使用的培养基pH呈弱碱性，其中琼脂不是营养物质

B．白地霉采用了平板划线法，桔梅奇酵母采用了涂布平板法

C．白地霉不能利用与普切明酸结合后的铁是出现红色抑菌圈的原因

D．补足Fe3+可以使桔梅奇酵母对白地霉的抑制效果逐渐减弱

5 . 纳米抗体具备体积小、结构简单、稳定性显著等优点，而带荧光蛋白的纳米抗体可以帮助我们了解蛋白质在细胞或生物体内的定位和功能，荧光－抗体融合复合物可作为靶向生物分子进行疾病诊断和治疗等。为了将某纳米抗体和绿色荧光蛋白基因融合表达，运用重组酶技术构建质粒。重组酶技术指的是重组酶通过识别两个DNA片段上的特定相同序列，将不同DNA片段连接，从而实现DNA重组，如下图1所示。请回答下列问题：

(1)分别进行PCR扩增片段F₁与片段F₂时，配制的两个反应体系中不同的有____。
(2)有关基因序列如下图2.引物F₂－F、F₁－R应在下列选项中选用____。

(3)将PCR产物片段与线性质粒载体混合后，在重组酶作用下可形成环化质粒，之后转化大肠杆菌。这一过程与传统重组质粒构建过程相比，无需使用的酶主要有____。
(4)如图1所示，转化后的大肠杆菌需选择培养基进行筛选，下列叙述正确的有____。

A．是否产生氨苄青霉素可作为筛选大肠杆菌是否转化的依据

B．转化后的大肠杆菌需培养一段时间后接种至选择培养基进行筛选

C．将梯度稀释后的菌液用接种环在培养基表面进行划线获得单菌落

D．选择培养基上常常会出现大量杂菌形成的菌落

(5)为了验证平板上菌落中的质粒是否符合设计，用不同菌落的质粒为模板，用引物F₁－F和F₂－R进行了PCR扩增，质粒P₁~P₄的扩增产物电泳结果如图3.根据图中结果判断，可以舍弃的质粒有____。

(6)对于PCR产物电泳结果符合预期的质粒，通常需进一步通过基因碱基序列测定确认，原因是____ 。

6 . 柑橘酸腐病是由白地霉菌引起的柑橘贮藏期常见的病害之一。抗菌肽是一种抑菌活性强、无环境污染的生物多肽。为研究抗菌肽对白地霉菌的抑菌效果，现用金属打孔器在多个长势相似柑橘果实的相同部位打孔，每个打孔处接种相同体积的处理液，比较15天后的病斑直径，各组处理及结果见表。下列相关叙述错误的是（　　）

组别	1	2	3	4	5
接种处理方式	接种一定体积的白地霉菌孢子悬浮液	抗菌肽溶液与白地霉菌孢子悬浮液混合后直接接种	先加入抗菌肽溶液，2h后接种白地霉菌孢子悬浮液	X	抗菌肽溶液液白地霉菌孢子悬浮液混合，培养2h后接种
15天后病斑直径/mm	41.3	13.9	29.3	28.7	11.2

A．金属打孔器在每次打孔前需进行灼烧灭菌，目的是防止杂菌污染

B．表中X应为先接种白地霉菌孢子悬浮液，2h后再加入抗菌肽溶液

C．抗菌肽与白地霉菌孢子悬浮液先后加入的抑菌效果强于混合加入的抑菌效果

D．实验结束后5个组别使用的柑橘不能立即丢弃

7 . Ⅰ、如图分别表示生命体内生物大分子的部分结构模式图，请据图回答：
(1)   甲图所示化合物遇碘呈________色，该化合物的单体是________。
(2)乙图所示化合物合成过程中形成的③键为________，常用________试剂鉴定该类化合物。
(3)丙图所示化合物形成过程中，脱水缩合生成的化学键是[       ]________，图示________键是维系其空间结构的重要化学键。
(4)II、如图示利用A、B、C三组平板从土壤中筛选、鉴定尿素分解菌的部分过程。请在下表空白处填写相应内容，完成实验操作与分析。

   

操作步骤	简要操作过程	操作目的、结果、分析
平板A制作、接种、培养	称5.0g牛肉膏、10.0g蛋白胨、5.0g NaCl、10.0g琼脂及一定量酚红加入1000mL蒸馏水中，调pH，分装，①________，倒平板（全营养培养基），接种菌种，……。	平板A在实验中的作用②________。
平板B、C制作、接种、培养	称1.4g KH2PO4、2.1g NaH2PO4、0.2g MgSO4·7H2O、10g葡萄糖、1.0g尿素、10.0g琼脂及一定量酚红加入1000mL蒸馏水中，……，用③________（接种工具）对B、C平板分别接种菌液、无菌水，盖好皿盖将培养皿倒置并在皿底作标记，适宜环境中培养。	C平板的结果表明④________。
结果观察	培养至菌落数稳定后，观察三组平板中菌落情况。	B平板中菌落周围出现⑤________，若某菌落周围没有出现该现象，可判断这种菌落的菌体能利用⑥________作为氮源。

8 . 人心肌细胞中的肌钙蛋白由三种结构不同的亚基组成，即肌钙蛋白T（cTnT）、肌钙蛋白I（cTnI）和肌钙蛋白C（cTnC），其中cTnI在血液中含量上升是心肌损伤的特异性指标。为制备抗cTnI的单克隆抗体，科研人员完成了以下过程。请据图分析回答下列问题：

(1)细胞培养中，培养液常用___方法灭菌。每隔2周用cTnI作为抗原注射小鼠1次，共注射3次，其目的是___，最后一次免疫后第3天，取脾脏内部分组织制成细胞悬液与骨髓瘤细胞诱导融合，常用的化学诱导因素是___。
(2)甲、乙、丙中，只含杂交瘤细胞的是___，②过程表示将乙细胞接种到多孔培养板上，进行抗体阳性检测，之后稀释、培养、再检测，并多次重复上述操作，其目的是筛选获得___。
(3)酶联免疫吸附双抗体夹心法是医学上常用的定量检测抗原的方法，具体原理如图所示：

据图分析，固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，这是由于不同抗体能与同一抗原表面的不同部位结合。该检测方法中，酶标抗体的作用是___，可通过测定产物量来判断待测抗原量。

9 . 青霉素发酵是高耗氧过程，发酵过程中给微生物持续高效地供氧是保证青霉素持续高产的关键。血红蛋白具有很强的携带O₂的能力，将其引入青霉菌是提高青霉素产能的思路之一、血红蛋白不仅存在于人和动物的红细胞中，某些细菌（如透明颤菌）细胞中也存在。研究人员为了将透明颤菌的血红蛋白引入青霉菌，设计了如下图所示的方案。回答下列问题：

注：某氨基酸缺陷型菌株是指该菌株在缺少该种氨基酸的培养基上会暂停生长
(1)上图步骤②采用的接种方法是__________，步骤③往培养基中添加的某种物质是__________。得到的平板中菌落较__________（填“大”或“小”）的菌株即为甲硫氨酸营养缺陷型菌株。
(2)溶菌酶属于免疫系统组成中的__________，蜗牛酶是从以植物和真菌为食的蜗牛消化道中提取的酶。处理⑤、⑥所用的酶分别是上述两种酶中的__________。
(3)简述图甲步骤⑧从融合细胞中筛选目的菌株的基本思路：__________。
(4)除了上述方案，请再提出一种将透明颤菌的血红蛋白引入青霉菌的技术手段__________。