3 . 大肠杆菌能进入实体瘤核心并保持较强活性，科研人员期望利用大肠杆菌构建一种基因表达可控的工程菌，期望用于人体特定部位实体瘤的免疫治疗。
(1)科研人员利用温度敏感型转录调控蛋白构建温控表达的质粒系统，如下图。

   

①利用来自λ噬菌体的温度敏感型转录抑制因子Tcl42作为“开关”构建温控抑制元件，在_____（选填“λ噬菌体”、“大肠杆菌”或“人”）中具强活性的启动子pLac可以使Tcl42持续性表达，抑制启动子pRL；当控温至42℃时才开启特定基因的表达。
②Tcl42开关仅在加热时瞬时激活特定基因，而免疫疗法需要数周才能见效，所以设计了“基因电路”——一次短暂的温度激活后可维持长期的基因表达。其核心基因包括重组酶Bxb1基因、分泌型αPD-L1蛋白基因（该蛋白可用免疫治疗）等。
请选择相关选项完善该“基因电路”的技术路线：_____及质粒，获基因电路 → 受体菌37℃时，蛋白Tcl42抑制启动子pRL →_____→ 免疫元件无功能（不表达αPD-L1） →_____→ 解除蛋白Tcl42对启动子pRL的抑制→_____→_____→细菌合成GFP，并分泌大量αPD-L1。
A、重组酶Bxb1基因不表达          B、菌体升温至42℃时
C、用不同的限制酶、DNA连接酶分别处理温控抑制元件、重组元件、免疫元件
D、启动子p7启动荧光蛋白GFP基因、αPD-L1基因的转录
E、重组酶Bxb1基因表达，进而引起启动子p7两侧发生重组
(2)科研人员用_____处理大肠杆菌，使其处于感受态，从而将“基因电路”质粒导入菌体内，经过培养、涂布后，筛选_____（选项），由此成功构建用于免疫治疗的温控工程菌（EcT）。
A、含有四环素的培养基上形成的菌落             B、具有绿色荧光的菌落
C、同时具有A和B特征的菌落                      D、具有A或B特征的菌落均可
(3)使用聚焦超声（FUS）装置，可以使动物特定范围的组织快速升温至42℃，从而实现体内微生物治疗的温度控制。为验证上述温控工程菌的治疗肿瘤效果，选取若干组生理状态相近的小鼠，经过7天的成瘤建模后，分别进行如下处理，并检测记录小鼠体内肿瘤体积。
第1组：注射生理盐水，2天后FUS处理；
第2组：注射温控工程菌，2天后FUS处理。请评价并完善实验方案_____。
最终证明温控工程菌可被FUS处理局部激活，并具有持续性肿瘤免疫治疗效果。
(4)若期望将上述温控工程菌用于临床实验，还需利用小鼠开展_____方面的研究。

8 . 东南景天中的HMA3基因能编码Cd（镉）转运蛋白，Cd转运蛋白能将土壤中的Cd吸收进体内，现欲将东南景天中的HMA3基因转入栾树，以增强栾树对 Cd的富集能力，从而有 效治理Cd污染，科研人员利用下图结构构建重组DNA，图1为HMA3基因所在DNA示意图，图2为质粒结构示意图，下列叙述正确的是（       ）

A．欲获取HMA3基因，可用引物1、引物2进行PCR循环至少2轮获得

B．用凝胶电泳鉴定PCR产物，引物1、引物2扩增的产物可得3条条带

C．构建含HMA3和GFP基因的重组质粒，需在引物上添加BglⅡ和HindⅢ的识别序列

D．用含潮霉素的培养基筛选受体细胞，能生长的为含重组质粒的受体细胞

9 . 甲胎蛋白（AFP）与肝癌的发生密切相关，临床上主要利用甲胎蛋白作为原发性肝癌的血清标志物，用于其诊断及疗效监测，某研究小组为制备抗AFP的单克隆抗体，其设计流程如图所示，其中杂交瘤细胞可以利用HAT培养基筛选（HAT培养基是含次黄嘌呤、氨基蝶呤 和胸腺嘧啶的选择培养基）。下列叙述错误的是（       ）

A．过程①需要用 HAT培养基和检测的抗原多次筛选

B．过程②中会表现出细胞贴壁生长和接触抑制现象

C．克隆培养杂交瘤细胞的关键是单个杂交瘤细胞培养而来

D．杂交瘤细胞多次传代培养后，用 AFP检测可能会表现阴性反应