1 . 蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，如图为蛛丝蛋白基因对应的DNA片段结构示意图，其中1-4表示DNA上引物可能结合的位置，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。下列有关叙述正确的是（       ）

A．若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，会破坏4个磷酸二酯键

B．若受体细胞为大肠杆菌，则需先用Ca2+处理，更利于实现转化

C．若用PCR技术获取目的基因，则图中的1、4分别是2种引物结合的位置

D．在PCR仪中根据选定的引物至少需经过6次循环才可获得32个符合要求的目的基因

2 . 人胰岛素基因表达的最初产物是一条肽链构成的前胰岛素原，经加工后形成两条肽链（A链和B链）的有生物活性的胰岛素。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：“AB”法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；“BCA”法是利用人体某细胞中的mRNA得到胰岛素基因，表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段。这两种方法使用同一种质粒作为载体。请据下图分析并回答下列问题：

   

(1)由于_______，“AB”法中人工合成的两种DNA片段均有多种可能的序列。“BCA”法是利用人体_______细胞中的mRNA，再由mRNA经________得到的胰岛素基因，________（填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子。
(2)如图是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限制酶_________的识别序列，PCR引物应该添加在识别序列的_______（填“3’或5’）端。通过上述方法获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，若计划用1个胰岛素基因为模板获得m（m大于2）个胰岛素基因，则消耗的引物总量是______个。引物序列中的的GC含量越高，对PCR过程中的_______步骤〔写出具体过程）影响最大，越_______（填“有利于”或“不利于”）目标DNA的扩增。
(3)PCR扩增的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，下列叙述中正确的有______。

A．PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在退火过程起作用

B．待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率

C．进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动

D．琼脂糖溶液中加入的核酸染料利于DNA在紫外灯下被检测

(4)β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。经________（处理方法）大肠杆菌后，与重组质粒混合培养一段时间，将大肠杆茵接种到添加了________和X-gal的培养基上筛选出_______色的菌落即为工程菌种。

3 . 被称为“水中小白鼠”的斑马鱼是一种体长4厘米左右的热带淡水鱼，与人类基因同源性高达87%，并有相似的器官、生理功能和信号通路。由于发育周期短、费用低、体外受精、透明等优点，斑马鱼现在越来越广泛地应用于毒性检测、疾病模型创制、药物筛选等领域中。
研究人员欲通过使胰岛素基因表达受阻从而构建糖尿病模型斑马鱼。吗啉反义寡核苷酸是一种RNA剪接抑制剂，通过将其注入斑马鱼受精卵可阻碍相关基因的表达。针对其作用原理，现有两种假说：
假说1：吗啉反义寡核苷酸导致RNA前体上内含子2的对应序列不能被剪切。
假说2：吗啉反义寡核苷酸导致RNA前体上内含子2和外显子3的对应序列同时被剪切。
   
为了验证上述假说，研究人员进行了如下实验：
(1)从受精卵发育了3天的实验组和对照组的细胞中提取总RNA，再通过逆转录获得cDNA。若假说1成立，选择上图所示引物2和引物3进行PCR后的结果为______（填字母）。

A．实验组有杂交带

B．实验组无杂交带

C．对照组有杂交带

D．对照组无杂交带

(2)若要证明假说2成立，进行PCR时，需要选择上图所示引物组合有__________。
(3)采用PCR技术扩增DNA需要引物的原因是__________________。
(4)为了获取大量斑马鱼胚胎干细胞用于药物筛选，可加入__________________，用于分散斑马鱼囊胚中的__________________。再取分散细胞作为初始材料进行______培养，然后分瓶继续培养。

4 . 四尾栅藻生长周期短、适应性强，是一种高潜力生物柴油新型原料，但油脂产量低。研究人员从含油量高的紫苏中提取DGATl（催化油脂合成的关键酶）基因，并成功导入四尾栅藻细胞内，获得转基因的产油四尾栅藻。其制备流程如图，图中Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，LacZ基因可使细菌分解培养基中的物质X-gal，进而使菌落呈现蓝色，无该基因或该基因被破坏，菌落呈白色。回答下列问题：

(1)从高表达的紫苏组织细胞中提取总的RNA，经_________获得cDNA，用于PCR扩增，PCR扩增DGATl基因时，使反应体系中的模板cDNA解旋为单链的条件是__________________。
(2)在DNA延伸的过程中，使用Taq DNA聚合酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是_____。
(3)构建的pMD19-DGATl导入经CaCl₂溶液处理的感受态大肠杆菌细胞中，并通过稀释涂布平板法接种到含_________的培养基中培养。一段时间后，挑选_________色的菌落以提取质粒pMD19-DGATl。
(4)用限制酶BamH I和Xba I切割pMD19-DGATl和pBI121，将其连接成重组表达载体pBI121-DGATl， 并将其导入四尾栅藻细胞中。与单酶切相比，双酶切的优点是________。

5 . 红细胞生成素（EPO）是人体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然 EPO来源极为有限，某科研团队采用基因工程培育转基因羊作为乳腺生物反应器，使其能合成EPO。下列有关叙述错误的是（       ）

A．构建表达载体时需将EPO基因插入乳腺蛋白基因的启动子的上游

B．一般情况下，该转基因羊中的EPO基因只在羊的乳腺细胞中表达

C．可用显微注射技术将含有EPO基因的表达载体导入羊的受精卵中

D．用PCR扩增人EPO基因，需要一段已知的EPO基因核苷酸序列

6 . “X基因”是DNA分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，需在PCR反应中加入两种引物，两种引物及其与模板链的结合位置如下图1所示。经4轮循环后产物中有五种不同的DNA分子，下列叙述错误的是（       ）

A．第一轮复制得到2个DNA分子，即①②各一个

B．第二轮复制得到4个DNA分子，即①②③④各一个

C．第三轮复制得到8个DNA分子，其中有2个等长的，也就是有2个X基因

D．第四轮复制得到16个DNA分子，其中有4个X基因

7 . 为了对重金属污染的土壤进行生物修复，研究者将从杨树中克隆的重金属转运蛋白（HMA3）基因与外源高效启动子连接，导入杨树基因组中（如图）。

为检测获得的转基因杨树苗中是否含有导入的HMA3基因，同时避免内源HMA3基因的干扰，在进行PCR扩增时，应选择的引物组合是（       ）

A．①+③

B．①+②

C．③+②

D．③+④

8 . 下列关于基因工程中有关酶的叙述不正确的是（　　）

A．限制酶水解相邻核苷酸间的化学键打断DNA

B．DNA连接酶可将末端碱基互补的两个DNA片段连接

C．DNA聚合酶能够从引物末端延伸DNA或RNA

D．逆转录酶以一条RNA模板合成互补的DNA

9 . 关于目的基因获取过程的叙述中，不正确的是（       ）

A．化学合成法可合成未知序列的任意大小的 DNA 片段

B．真核与原核生物的目的基因均可从基因文库中提取

C．原核生物的目的基因一般不从 cDNA 文库中提取

D．若可设计出特定引物，PCR 方法也可获取目的基因

10 . 下列所示的酶中，作用效果最相似的是

A．解旋酶、DNA聚合酶	B．DNA聚合酶、Taq酶
C．纤维素酶、胰蛋白酶	D．DNA水解酶、逆转录酶