22. 利用RNAi技术(RNA干扰)可以抑制细胞内特定基因表达。研究者选择MS26基因中的一段序列(rMS26),以PMI作为筛选标记,最终构建玉米植物重组表达载体MS26RNAi,转入到玉米幼胚中,通过植物组织培养后获得目的植株。
(注:PMI是酿酒酵母磷酸甘露糖异构酶基因,该酶能将6—磷酸甘露糖转化为6—磷酸果糖,从而使生物体能够利用甘露糖作为碳源)
请分析回答以下问题:
(1)提取玉米MS26基因形成的RNA,使用
_________法合成cDNA,选择其中的一段序列rMS26用于构建RNAi载体。
(2)常用的标记基因主要是抗生素抗性基因和除草剂抗性基因,已经引起了社会的广泛争议。用PMI做标记基因的目的是为了
_________,可转入含
_________的选择培养基中实现,其优点是
_________。
(3)RNAi载体结构中有一段正向和反向的rMS26,其直接目的是:
_________,请据图1分析MS26基因沉默的原理:
_________。
(4)T—DNA插入玉米的位置是随机的,当其插入基因内部时导致
_________,这是获得植物突变体的一种重要方法。若进一步确定T—DNA是否插入MS26基因中,某同学尝试采用“三引物法”进行PCR扩增,即采用三种引物(LP、RP、BP),LP、RP为与目的基因片段互补的特异引物,BP为插入T—DNA的特异引物,如图2所示。(说明:两端的引物本身长度小于0.1kb,而T—DNA本身的长度约为17kb,插入基因后会阻抑两端引物的扩增产物的形成。)请根据下表中三种样品的预期电泳结果判断哪个是纯合突变体
_________,理由是
_______________。
引物种类样品序号 | LP+RP | BP+RP |
样品1 | 有大片段 | 无 |
样品2 | 有大片段 | 有小片段 |
样品3 | 无 | 有小片段 |