2 . 根据S型肺炎链球菌荚膜多糖的差异，将其分为SⅠ、SⅡ、SⅢ等类型，不同类型的S型发生基因突变后失去荚膜，成为相应类型的R型（RⅠ、RⅡ、RⅢ），R型也可回复突变为相应类型的S型（SⅠ、SⅡ、SⅢ）。S型的荚膜能阻止外源DNA进入细胞，为探究S型菌的形成机制，科研人员将加热杀死的甲菌破碎后获得提取物，冷却后加入乙菌培养液中混合均匀，再接种到平板上，经培养后检测子代细菌的类型。下列相关叙述正确的是（       ）

A．肺炎链球菌的拟核DNA有2个游离的磷酸基团

B．若甲菌为RⅡ，乙菌为SⅢ，子代细菌为SⅢ和RⅡ，则能说明RⅡ是转化而来的

C．若甲菌为SⅢ，乙菌为RⅡ，子代细菌为SⅢ和RⅡ，则能说明SⅢ是转化而来的

D．若甲菌为SⅢ，乙菌为RⅢ，子代细菌为SⅢ和RⅢ，则能排除基因突变的可能

4 . 可利用重叠延伸PCR诱变技术将两个独立的基因在指定位点进行连接，以获得融合目的基因。该技术需要一对内部致突变引物和一对侧翼引物，经过三个PCR反应。下图表示将基因A序列与基因B序列在ATG处定点拼接的过程。请回答下列问题：

(1)PCR反应体系中需要加入的物质除了图中所示的物质外，还必须加入4种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶和___等，其中Mg²⁺的作用是___。
(2)图中致突变引物1和致突变引物2序列的关系是___（填“相同”“碱基互补”或“无关”）。致突变引物1的5'端序列是根据___的部分碱基序列设计的。
(3)PCR3第一次循环中理论上复性的产物有___种，其中能进行进一步延伸的是图中的___（填序号），原因是___。

6 . 人的X染色体和Y染色体大小、形态不完全相同，存在着同源区段（Ⅱ）和非同源区段（Ⅰ、Ⅲ），如下图所示。下列有关叙述正确的是（　　）

   

A．若某病是由位于非同源区段Ⅲ上的致病基因控制的，则患者均为男性

B．若某病是由位于同源区段Ⅱ上的隐性致病基因控制的，则该病的遗传情况与性别无关

C．若某病是由位于非同源区段Ⅰ上的显性基因控制的，则男性患者的女儿患病的概率为50%

D．若某病是由位于非同源区段Ⅰ上的隐性基因控制的，则患病女性的儿子一定患病

7 . 烟草易受烟草花叶病毒（TMV）感染而大幅度减产。绞股蓝（一种植物）细胞中含有抗TMV基因，能抵抗TMV感染。研究人员利用转基因技术培育出了抗TMV烟草。
(1)下表是相关研究中的一些步骤，请结合所学基因工程知识完成以下表格。

实验步骤	方法要点
筛选合适的目的基因	从绞股蓝细胞中提取总RNA，通过逆转录过程获得DNA；再通过①_____________技术扩增出大量目的基因片段
②________	将目的基因插入Ti质粒
转化细胞	常用③__________方法将重组质粒导入受体细胞
筛选转基因细胞	在含有卡那霉素的培养基上培养受体细胞
获得再生植株	运用植物组织培养技术培育
转基因植株分析	从分子水平与④____________水平上，对转基因植株进行检测与鉴定

部分载体结构：       LEA基因序列：

   

(2)为研究干旱胁迫基因LEA和VOC对绞股蓝油脂的积累机制，科研人员构建了两个基因表达载体。其中基因LEA与荧光素酶基因（Luc）构建成基因表达载体甲，基因VOC和标记基因构建成基因表达载体乙，相关序列及酶切位点如图所示。箭头表示转录方向。
①利用PCR扩增LEA基因时，需要在引物的__________（填“3’端”或“5’端”）添加限制酶识别序列，且常在两条引物上设计加入不同的限制酶切位点，添加序列对应的限制酶是______。
②为了构建基因表达载体甲，依据图中已知碱基序列，在PCR扩增仪中加入的引物的碱基序列为______________________。
③乙酰—CoA羧化酶基因（AC）是油脂合成过程的关键酶基因，甘油三酯酯酶基因（ATGL）是油脂分解过程的关键酶基因。将基因表达载体甲、乙分别导入植物细胞培养成转基因植物A、B，在干旱胁迫的环境下培养两种转基因植物和正常植物，分别检测植物体内AC和ATGL基因的表达水平，结果如下图。
在分子水平上，用__________方法检测AC酶和ATGL酶的含量可得到如下结果。

	正常植株	转基因A植株	转基因B植株
AC酶
ATGL酶

④基于以上研究，干旱胁迫基因LEA和VOC在绞股蓝油脂积累中的机制是：在干旱胁迫的环境下，_______、_________。

8 . 切割DNA分子的工具是限制性内切核酸酶，这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。迄今分离得到的限制酶有数千种，其中许多已经被商业化生产。
(1)限制酶在原核生物中的主要作用是___，限制酶能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的___键断开。
(2)如图将质粒A和目的基因正确连接构建重组质粒B，设计扩增目的基因的引物时，在两种引物的5'端分别添加___（填限制酶）的识别序列，选用___（填限制酶）切割质粒A，酶切后的载体和目的基因片段通过___（填“E.coli”或“T4”）DNA连接酶作用后获得重组质粒。

   

限制酶	识别序列及切割位点（5′→3′）
BamH I	G↓GATCC
Bcl I	T↓GATCA
Sma I	CCC↓GGG
Sau3A I	↓GATC

(3)导入重组质粒的大肠杆菌对两种抗生素的抗性是___。若从平板上长出的菌落中提取重组质粒B，用Sau3AⅠ进行完全酶切，最多可以得到___种大小不同的DNA片段。对重组质粒进行测序，若目的基因与质粒正确连接，则图中M连接处的序列可能是___。
A.5′-GGATCCCGCAGCAA-3′
B.5′-CCCGGGATCTACGC-3′
C.5′-TGATCCATCTACGC-3′
D.5′-TGATCACGCTACTC-3′

10 . 为获得转G₃-GFP融合基因纯合小鼠，科研人员将绿色荧光蛋白（GFP）基因和G₃基因拼接到一起，然后导入小鼠受精卵。目的基因和载体所在DNA上的限制酶识别位点及相关限制酶识别序列如图1所示，A、B、C、F、R为不同引物。实验获得能正常表达两种蛋白质的杂合子雌、雄小鼠各一只，利用荧光蛋白活体成像系统进行检测，发现两者均为GFP转基因阳性小鼠。

   

(1)为了使GFP基因能正确插入载体，在PCR扩增GFP编码序列的过程中，需要设计引物F和R,在两个引物的____（填“3′”或“5'”）端需分别插入限制酶________的识别序列。
(2)在GFP基因的扩增及重组载体的构建过程中，除限制酶外，还需要的酶有________。
(3)将实验获得的两只雌、雄杂合子小鼠（P）进行杂交获得F₁若干，利用荧光蛋白活体成像系统检测后，研究人员从这些小鼠中提取Gata3基因相关DNA片段，设计了引物A和C用于PCR扩增，扩增产物电泳结果如图2所示，则________小鼠是Gata3-GFP基因纯合子小鼠；若用引物A和B进行PCR扩增，________（填“能”或“不能”）区分GFP转基因阳性小鼠中的杂合子和纯合子，原因是________。
(4)研究人员常用DNA分子杂交技术检测目的基因是否整合到受体细胞的染色体DNA上，检测时用____标记的目的基因单链片段作为探针。不对称PCR能够大量制备单链DNA片段，其基本原理是采用不等量的一对引物，经若干次循环后，低浓度的引物（限制性引物）被消耗尽，以后的循环只产生高浓度引物（非限制性引物）的延伸产物，结果获得大量单链DNA（ss-DNA）。若反应体系中原有100个模板DNA,最初10个循环后限制性引物耗尽，再进行20个循环，理论上可制备ss-DNA________个（用科学记数法表示），在这30个循环中ss-DNA的产生量主要受________的影响。