1 . 胶原蛋白在维持器官、组织、细胞等方面发挥着关键性作用，传统提取方法得到的胶原蛋白成分复杂，还可能携带动物病毒等。科学家将合成胶原蛋白的基因kit导入大肠杆菌构建基因工程菌，过程如下图所示。请据图回答下列问题：

   

(1)图中①过程需要使用_____酶，②过程需要用到的酶有限制酶和_____。
(2)用图中方法得到的kit基因较少，可以采用PCR技术进行扩增，已知kit基因的部分序列如下：
5' -CGGG ATCCALLAGAATTCCG-3'
3' -GCCCTAGGTLLTCTTAAGGC-5'
根据上述序列设计引物为_____（填字母），以_____（填限制酶）进行双酶切kit基因与质粒pET-28a（+），为了实现目的基因与运载体的连接，则需要在引物的_____端添加限制酶识别序列。
A．5' -GCCCTAGGT-3'        B．5'-CGGAATTCT-3'
C．5' -CGGGATCCA-3'       D．5'-GCCTTAAGA-3'
(3)若要检测kit基因是否在大肠杆菌体内发挥作用，首先需要检测大肠杆菌的_____（选填“DNA”或“RNA”）。
(4)双酶切kit基因，与质粒pET-28a（+）长度为170bp片段进行置换，构建重组质粒pET-28a（+）-kit，上述两种质粒在Hind Ⅲ酶切后片段长度如下表所示，

质粒类型	pET-28a（+）	pET-28a（+）-kit
Hind Ⅲ酶切片段	1000bp、2550bp	1000bp、2000bp、700bp

则kit基因长度为_____，由此判定kit基因上有2个Hind Ⅲ酶切位点，原因是_____。
(5)菌液PCR是直接以菌体热解后的DNA为模板、以目基因两端序列为引物进行扩增的方法，根据凝胶电泳结果可初步鉴定菌落是否含有目的基因。对构建的基因工程菌进行菌液PCR验证，根据初步验证的结果提取大肠杆菌的质粒进行双酶切再验证，结果如下图所示。分析可知，基因工程菌的构建_____（选填“是”或“否”）成功，原因是_____。

   

2 . I.供体细胞的分化状态和表观遗传修饰模式是影响体细胞核移植胚胎发育的重要因素。为研究供体细胞RNAm⁶A修饰（即RNA某位点的甲基化）水平对猪核移植胚胎发育的影响，研究者进行系列实验。
(1)核移植的受体是_____细胞，核移植后的重构胚发育至一定阶段可利用胚胎移植技术转移到代孕母体子宫内以获得子代个体，从早期胚胎中分离获得的具有自我更新和分化潜能的_____可用于医学研究。
(2)RNAm⁶A修饰可通过提高mRNA结构稳定性来影响早期胚胎发育。猪骨髓间充质干细胞（甲组）属于多能干细胞，猪胎儿成纤维细胞（乙组）则是处于分化终端的体细胞。研究者比较了两细胞内RNAm⁶A修饰水平及其作为核供体时重构胚的发育效率，结果如图1、2。

结果表明，核供体细胞的分化程度越高，_____越低。
(3)研究发现甲组细胞内甲基转移酶M（催化RNAm⁶A修饰）的表达水平高于乙组，为验证RNAm⁶A修饰与核移植胚胎发育能力的关系，研究者进行如下实验：

组别	对核供体细胞的处理方法	核移植胚胎发育能力的检测结果
		胚胎总数	胚胎卵裂率	囊胚率
对照组	导入空载体	187	59.4％	16.8％
实验组	导入M基因表达载体	185	71.3％	27％

导入空载体是为了排除_____等对实验结果的干扰。结果表明，_____可提高核移植胚胎的发育能力。
(4)为研究导致不同供体细胞RNAm⁶A修饰水平差异的原因，研究者分析了M基因启动子的甲基化水平，发现骨髓间充质干细胞中M基因启动子的甲基化水平为22％，而猪胎儿成纤维细胞则为50％。
据此设计实验：实验组用DNA甲基化抑制剂处理骨髓间充质干细胞，对照组不处理；检测两组的M基因启动子甲基化水平。
请修正实验方案：_____。
Ⅱ.兰花人工种子由人工种皮、原球茎和人工胚乳构成。原球茎是由胚性细胞组成、形态类似球茎的结构，可发育成完整植株，人工胚乳可调控原球茎的休眠，并为原球茎的发育提供营养成分和激素。回答下列问题：
(5)从盆兰花获取茎尖，对其进行_____处理后接种于培养基，茎尖通过_____后生长为原球茎。原球茎在发芽培养基上可很快长出幼叶，然后在生根培养基中形成完整植株。
(6)将原球茎切成小块，转入增殖培养基进行继续培养，可以得到大量原球茎，实现兰花的快速繁殖。在增殖培养基中添加椰子水，原球茎会长得更饱满。不同成熟度椰子的椰子水对原球茎生长的促进效果不同，推测原因是不同成熟度椰子的椰子水中_____和_____的含量存在差异。

3 . 为降低人类乳腺癌治疗药物的副作用，科研人员尝试在单克隆抗体技术的基础上，构建抗体一药物偶联物（ADC），过程如下图所示。

(1)动物细胞培养时，可以用_____酶处理动物组织，得到分散的组织细胞，培养基中应含有细胞所需要的各种营养物质。动物细胞培养的特点是_____。
(2)为了刺激小鼠机体产生更多的B淋巴细胞，每隔2周用取自_____的特定抗原注射小鼠1次，共注射3次。最后一次免疫后第3天，取脾脏内部分组织制成细胞悬液与骨髓瘤细胞诱导融合，为了获得杂交瘤细胞，应将诱导融合后的细胞放在_____培养基上进行培养。
(3)通过过程②得到的细胞还必须经过过程③克隆化培养和_____才能筛选得到符合要求的杂交瘤细胞，杂交瘤细胞可采用注射到小鼠腹腔内培养或进行体外培养的方式进行扩大培养。体外培养时，首先应保证其处于_____的环境，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要控制气体条件是_____与5%CO₂的混合气体，此外在使用合成培养基时通常还需加入血清。
(4)单克隆抗体的优点是_____。单克隆抗体是ADC中的_____（填“a”或“b”）部分。
(5)研究发现，ADC在患者体内的作用如下图所示。

①单克隆抗体除了运载药物外，还有_____等作用。
②ADC进入乳腺癌细胞后，细胞中的溶酶体可将其水解，释放出的药物最终作用于细胞核，可导致_____。
③ADC能降低乳腺癌治疗药物的副作用，是因为单克隆抗体能精确地定位乳腺癌细胞，该过程依赖于_____原理。

4 . I、下图甲、图乙分别是两类高等生物细胞局部的亚显微结构模式图，请据图回答：

(1)图甲和图乙细胞中共有的细胞器_____（填写编号）。
(2)细胞质中支撑着细胞器的结构是由_____组成的。肽链合成的场所是_____（填写编号），某条肽链由a个氨基酸组成，其分子式为C_xH_yN_mO_nS₃（m>a，n>a+1），并且是由下列4种氨基酸组成的，那么该物质彻底水解后将会得到乙物质数目为_____。

(3)若B为组成菠菜叶片的叶肉细胞，叶片进行光合作用时叶绿体会产生淀粉。某同学想用菠菜叶片设计实验证明上述结论。请你帮他写出设计思路中的自变量_____。
Ⅱ、细胞中蛋白质的分选过程需在多种结构的协同作用下完成。下图1为相关蛋白质的分选过程示意图，a～d表示细胞结构，①-④表示生理过程。请回答下列问题：

(4)图1中细胞中膜面积最大的细胞器是_____，除图1所示类型外，另一类的主要功能是_____。
(5)图1中信号肽序列与相应的_____识别，实现蛋白质的定向转运；胞浆蛋白是细胞中“永久”成分，而不能被分选至细胞外是因为_____。
(6)下列物质可在b中加工、分选的有_____。

A．促甲状腺激素释放激素

B．还原型辅酶I

C．水通道蛋白

D．细胞骨架

(7)结构a与b之间存在囊泡的双向转运，药物X可特异性地阻碍a、b间正向通路，而不影响反向通路。如图2所示是细胞中囊泡运输的一般模式，据图分析药物X的作用机制可能有_____。

5 . 下列实验操作与实验现象的描述错误的是（　　）

选项	实验操作	实验现象
A	用苏丹Ⅲ染液染色花生子叶切片，镜检	子叶细胞间也有橘黄色颗粒
B	用适量新配制的斐林试剂加入鲜榨的甘蔗汁，50℃-65℃水浴加热	溶液呈蓝色
C	用台盼蓝染液染色酵母菌涂片，镜检	死亡的酵母菌被染成蓝色
D	用带有适量红墨水的0.3g/mL蔗糖溶液处理洋葱鳞片叶内表皮装片，镜检	红色的液泡逐渐变小，颜色逐渐变深

A．A

B．B

C．C

D．D

6 . 下列关于菊花组织培养的叙述，正确的是（　　）

A．用自然生长的茎进行组织培养须用适宜浓度的乙醇和次氯酸钠混合液消毒

B．组培苗锻炼时采用蛭石作为栽培基质，蛭石能提供生长支撑和促进植物生长

C．为防止杂菌污染，从接种外植体到生成试管苗尽量在同一个锥形瓶内完成

D．培养瓶用专用封口膜封口可防止外界杂菌侵入并阻止瓶内外的气体交换

7 . 下列有关传统发酵食品制作中发酵条件合理控制的叙述，错误的是（　　）

A．果酒发酵转为果醋发酵后需适当升温并持续通气

B．果醋制作过程中发酵液pH逐渐降低，果酒制作过程中情况相反

C．制作泡菜时注意保持坛盖边沿的水槽中始终有水

D．向发酵液中添加前一次的发酵物可提高发酵速度

8 . 蛋白质可以与多种物质结合，赋予蛋白质复合体多种功能，下列叙述错误的是（　　）

A．冬小麦细胞内蛋白质与水结合，有利于其抵抗寒冷环境

B．洋葱根尖分生区细胞核中的蛋白质与DNA结合，作为其遗传物质

C．大肠杆菌细胞内蛋白质与RNA结合，可以参与蛋白质的合成

D．肝细胞膜上的蛋白质与糖类结合，可以参与细胞间的信息交流

9 . 免疫应答的特殊性与记忆包括三个事件：①对“非己”的分子标签进行特异识别；②淋巴细胞反复分裂产生数量大的淋巴细胞群；③淋巴细胞分化成特化的效应细胞群和记忆细胞群。下列叙述正确的是（       ）

A．针对胞外毒素，事件①中一个未活化的B细胞可能被任何一种胞外毒素致敏

B．针对异体移植细胞，事件①中辅助性T细胞和细胞毒性T细胞都需接受抗原MHC复合体的信息

C．事件②中，辅助性T细胞在胸腺中大量增殖，分泌白细胞介素-2等多种蛋白因子

D．事件③中，效应细胞群和记忆细胞群能直接杀灭和清除入侵病原体

10 . 蛋白质等大分子在持续高血糖状态下自发地与葡萄糖等反应，生成稳定的晚期糖基化终末产物（AGEs），该过程不需要酶的催化。研究表明，AGEs会加速人体的衰老并导致许多慢性退化型疾病的发生。下图表示AGEs对某细胞的主要影响机制。相关叙述错误的是（       ）

A．物质A是丙酮酸，图示细胞为胰岛B细胞

B．蛋白质与葡萄糖反应生成AGEs时，伴随着肽键的形成

C．AGEs进入细胞的方式体现了细胞膜的流动性

D．AGEs进入细胞后，会促进线粒体的凋亡、抑制胰岛素的分泌