4 . 番茄是两性植物，既可自花受粉也可异花受粉，具有明显的杂种优势。雄性不育是实现杂种优势利用的重要途径。
(1)目前番茄雄性不育ms系的应用最为广泛，ms基因是野生型植株2号染色体上MS基因（可育基因）中插入一段DNA序列形成的，由此可见该种雄性不育株的变异类型是____。
(2)番茄幼苗茎秆有两种性状，紫茎（A）对绿茎（a）为显性，研究者将苗期紫茎雄性可育和苗期绿茎雄性不育两种纯合品系杂交，F₁自交，并对F₂在苗期和结果期进行调查，结果如表所示：

F2	检测单株数	可育株	不育株
苗期紫茎单株	各取90株	89株	1株
苗期绿茎单株		1株	89株

上述结果说明亲代个体中ms基因与____（填“A基因”或“a基因”）位于同一条染色体上，依据上述发现，育种工作者选择____番茄幼苗即可获得雄性不育株。
(3)目前雄性不育株多以自然变异为主，可供研究或应用的数量有限。某科研团队利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除雄蕊特异基因SISTR1成功获得了雄性不育番茄。CRISPR/Cas9 系统主要由向导RNA（sgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，sgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割，其机制如图所示。

①CRISPR/Cas9系统的表达涉及过程I和II，其中II过程表示____。
②sgRNA可引导识别目标DNA序列的原理是____，Cas9蛋白可催化____键断裂，剪切特定DNA片段。
③基因编辑是否成功可以通过提取相关基因进行PCR扩增后经____鉴定。

6 . 为研究果蝇K基因的功能，科研人员运用CRISPR基因编辑技术“敲除”了K基因。

(1)CRISPR系统由向导RNA和Cas9核酸酶组成，向导RNA可与DNA的一条链通过_____原则结合，Cas9酶能将与之结合的双链DNA切割，如图1所示。Cas9酶与基因工程使用的限制酶作用的差异是_____。
(2)为后续筛选K基因“敲除”的果蝇，在K基因DNA断裂位点插入红色荧光蛋白基因（RFP）需提供携带有红色荧光蛋白基因的供体质粒。
①应选用_____处理图2所示的质粒和红色荧光蛋白基因，以构建供体质粒，同时避免质粒自连。
②将Cas9酶基因、向导RNA基因和供体质RFP基因粒导入果蝇的_____中，若检测到红色荧光，则表明K基因可能被成功“敲除”，该受精卵发育成的果蝇即为F₀代果蝇。
(3)为确认K基因是否被成功“敲除”，科研人员进行了如下实验：

①科研人员用图3中的引物I、II、III对F₀代果蝇DNA进行PCR并电泳检测（大于10kb片段单次PCR无法完成扩增）。若敲除成功，则观察到的不同个体电泳条带可能有两种情况：_____或_____（长度单位：kb），出现这两种情况的原因是_____。
②近年来，科研人员又发现了一种检测基因的方法——Cas12a酶法。该酶类似Cas9能够在向导RNA的作用下，在特定位点剪切目标DNA之后，还发挥非定向切割单链DNA的功能（如图）。用该方法检测敲除是否成功并排除“脱靶”的方法是：利用_____序列设计向导RNA，取待检测细胞克隆导入_____和报告分子，观测指标是_____。

(4)为进一步研究K基因功能，科研人员做了如下表的实验，由此推测K基因的功能是_____。

	子代果蝇个数（只）
野生型♂×野生型♀	103
野生型♂×K基因“敲除”果蝇♀	109
K基因“敲除”果蝇♂×野生型♀	0