1 . t-PA蛋白是心梗和脑血栓的急救药。为心梗患者注射大剂量的t-PA蛋白会诱发颅内出血。将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。图1是通过两次PCR操作，进行定点突变获取t-PA改良基因和利用质粒pCLY11构建含t-PA改良基因的重组质粒，然后导入大肠杆菌生产改良的t-PA蛋白示意图。

(1)第二次 PCR 过程中至少需要_____次循环才能获得双链等长t-PA改良基因。若改良t-PA基因的转录模板链为图中的α链，则第二次 PCR 操作中的引物3、引物4分别是_____。（填字母）
A．5'-CGCGAAAGAGACGGTTCA-3'（下划线为突变碱基）
B．5'-ACCCGGGCGACATCGTA-3'
C．5'-GTAGATCTGGCCTCGAGTA-3'
D．大引物的①链
E．大引物的②链
(2)培养大肠杆菌的培养基从作用上分类，属于_____培养基；该培养基的基本营养成分包括水、无机盐、_____。
(3)改良的t-PA基因约有1600个碱基对。提取大肠杆菌的DNA，依据改良t-PA基因的序列设计引物，进行PCR扩增。结果如图2所示：

加样孔位于_____（填“甲”或“乙”）端。泳道1条带中的PCR产物_____（填“一定”“不一定”或“不”）是改良的t-PA基因，理由是_____。

2 . 白色污染问题已引起全社会广泛关注，降解塑料的研究和开发是解决白色污染的理想途径之一。地膜的主要成分是聚乙烯[化学式为（C₂H₄）_n]。残留在土壤中的地膜难以被降解，为筛选出高效降解地膜的细菌，研究人员进行了如图所示的操作。X培养基是选择培养基，聚乙烯分解菌在该培养基上会形成抑菌圈。回答下列同题：

(1)在筛选聚乙烯分解图过程中，应选择__________的土壤，制作培养基时，应将________作为X培养基中的唯一碳源。
(2)为了证明所配制X培养基具有选择作用，在恒温培养前，需要将接种后的X培养基平板和接种后的完全培养基平板同时进行培养，待两种培养基平板上的菌落生长稳定时，比较两种平板培养基上的菌落数。若结果为_______________，则可证明上述观点。
(3)可挑选X培养基中的__________（填序号）中的单菌落接种到Y培养基上进行培养。配制Y培养基时，其pH一般调至__________。
(4)在5个平板上各接种稀释倍数为10³的菌液样品0.1mL，培养一段时间后，平板上的菌落数分别为28、50，52，54，313，则每升原菌液样品中细菌数为_________个。

3 . 科研人员利用MRS-溴甲酚绿培养基，从传统臭鳜鱼中分离筛选到一株乳酸菌，并研究其对多种微生物的抑菌能力。MRS-溴甲酚绿培养基的配方见下表，乳酸能与碳酸钙反应出现溶钙圈，溴甲酚绿为pH显色剂，酸性显示黄色。科研人员分别将含有四种病原菌的培养基倒入A~D四个培养皿中，通过一定的方法使每个培养基上形成4个大小相同的小孔，标号为1~4。1号孔作为对照，2~4号孔中均加入100μL含有该株乳酸菌代谢产物的液体培养基，在适宜条件下静置培养24h，测量抑菌圈直径，结果如下图。下列叙述正确的是（       ）
MRS-溴甲酚绿培养基配方

物质	胰蛋白胨	葡萄糖	牛肉膏	碳酸钙	酵母粉	溴甲酚绿	番茄汁	琼脂
含量	10g/L	10g/L	10g/L	20g/L	10g/L	0.1g/L	200g/L	18g/L

A．分离筛选乳酸菌时，应选择具有溶钙圈的黄色菌落继续培养

B．应向1号孔中加入100μL无菌水作为对照

C．传统臭鳜鱼不容易变质与乳酸菌能抑制多种微生物的增殖有关

D．该株乳酸菌代谢产物对四种病原菌都有抑制作用，但对丁香假单胞菌的抑制效果最好

4 . 北京航空航天大学教授杨军成功从黄粉虫幼虫消化道中分离出能降解聚乙烯塑料的细菌——微小杆菌YT2。下图表示目的菌的获取过程。下列相关叙述中，合理的是（　　）

A．富集培养应使用牛肉膏蛋白胨培养基，以促进目的菌增殖

B．选择培养基的成分中应以塑料作为唯一碳源

C．将1ml菌液加入培养基，再使用涂布器进行均匀涂布

D．使用固体斜面培养基保存微生物时，应置于低温环境中

5 . 田间常施用的草铵膦（含碳有机物）农药，在环境中难以降解。科学家通过图1所示方法筛选出了可降解草铵膦的植物乳杆菌（ST-3），并研究了固定态（固定在多孔载体上）和培养液中游离态的ST-3的降解效果，结果如图2所示。下列相关叙述错误的有（　　）

A．图1中②过程可使用无菌水，③④⑤过程应用以草铵膦为唯一碳源的培养基

B．图1中配制好的培养基可放入干热灭菌箱内进行灭菌处理

C．由图2可知，固定态ST-3对土壤中草铵膦的降解效果优于游离态ST-3

D．固定态ST-3降解率高可能是因为载体避免ST-3直接接触高浓度草铵膦

6 . 2023年杭州亚运会实现首个“无废亚运”，将绿色、环保的理念细化到极致，为筛选对抗生素有抗性、能高效降解淀粉的微生物，提高生化处理效率，亚运会研究人员将餐余垃圾机械化处理后加入装有无菌水的锥形瓶中制备餐余垃圾浸出液，然后进行如图所示的操作。下列说法不正确的是 （       ）

   

A．X培养基含抗生素且以淀粉为唯一的碳源

B．X培养基添加了凝固剂，可用于微生物的分离和纯培养

C．有的菌落周围出现透明圈是因为淀粉分解菌将菌落周围的淀粉分解了

D．Y培养基中淀粉剩余量越高，说明淀粉分解菌的分解能力越强

7 . 研究者从温泉中筛选出高效产生耐高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图1所示。将得到的菌悬液转接到同时含有葡萄糖和淀粉作碳源的固体培养基上培养，得到若干菌落后用碘液作显色处理，结果如图2所示。下列说法正确的是（       ）

A．透明圈直径与菌落直径的比值越大，说明该微生物分解淀粉的能力越强

B．图2培养皿要放在高温条件下培养，周围显蓝色的菌落含有所需要的嗜热菌

C．①②合称为稀释涂布平板法，实验使用的培养基和培养皿用干热灭菌

D．甲、乙试管为液体培养基，液体培养基能分离获得水生嗜热杆菌单菌落

8 . 培养基可以为培养物提供其生长繁殖所需的营养。根据加入的琼脂的含量，培养基可以分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。下列关于培养基的叙述中，错误的是（　　）

A．对微生物种类进行鉴定时，通常选用固体培养基

B．使用培养液时可以搭配摇床，以增加溶氧量

C．利用植物细胞培养获得代谢产物时，通常选用液体培养基

D．使用液体培养基可对细胞扩大培养，但无法实现分离纯化

9 . 堆肥指利用自然界广泛存在的微生物，有控制地促进固体废物中可降解有机物转化为稳定的腐殖质的生物化学过程。下图为堆肥处理时材料内部温度的变化曲线。若要从堆肥材料中筛选出能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌，下列相关叙述错误的是（　　）

A．微生物呼吸作用释放的热量积累，导致堆肥内部温度逐渐升高

B．与a点相比b点时微生物的数量较多，与b点相比c点时微生物种类较多

C．c点时，可对堆肥取样并用角蛋白氮源培养基对微生物群进行培养和筛选

D．若采用平板划线法分离微生物，无需对取样获得的原液进行适当稀释后划线

10 . 几丁质是甲壳动物的外壳、昆虫的外骨骼和许多真菌细胞壁的组成成分。几丁质酶可以水解几丁质。科研人员从虾壳堆积处的土壤中取样进行富集培养之后，制备以胶体几丁质为唯一碳源的培养基A．采用透明圈法、筛选出产几丁质酶活性高的无色杆菌菌株ZIWW8
(1)培养基A在常温下呈__________态。
(2)几丁质酶的产量与培养基中的氮源的种类、初阶PH值等有关，课题组成员进行了有关的优化实验，得出以下实验结果。据实验结果可知，在_______培养条件下几丁质酶活力最高。
不同氢波对zms国长产几丁医酯的影响

氮源	酶活力
氯化铵	20.7±1.3
硫酸铵	17.8±1.5
硝酸铵	6.4±1.9
尿素	13.3±1.0
蛋白陈	12.1±1.8
硝酸铵	19.2±0.2

   
(3)从生物材料中得到的几丁质酶提取液中往往含有一些无机盐类的小分子，可以用_______（填“盐析”或“透析”）的方法去除这些小分子。
(4)进一步提纯几丁质酶可用凝胶色谱法，其原理是________。分离蛋白质时，最先从色谱柱中洗脱出来的是________的蛋白质分子。
(5)鉴定几丁质酶可以用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。SDS能使蛋白质发生完全变性，并掩盖_______，使得电泳迁移率完全取决于分子的大小。某蛋白质分子的分子量为800kDa（千道尔顿），对该蛋白质分子进行电泳时，只在100KDa和300kDa处出现两条带，说明该蛋白质是由_______条肽链组成的，
(6)几丁质酶常被添加进抗真菌霜剂和洗剂中，用于治疗各种真菌感染的人类疾病，其疗效显著且无副作用的原因是_______