1 . 我国科学家利用苏云金杆菌中的Bt基因培育出转基因抗虫棉，下列说法错误的是（       ）

A．科学家已对Bt基因的序列信息，表达产物等有了较为深入的了解

B．筛选Bt基因后可以利用PCR技术对其进行大量的扩增

C．培育转基因抗虫棉的核心工作是将Bt基因导入棉花细胞中

D．检查转基因抗虫棉是否培育成功首先要进行分子水平的检测

2 . 下面关于聚合酶链式反应（PCR）的叙述，错误的是（       ）

A．PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合

B．PCR过程中DNA聚合酶能够将4种脱氧核苷酸加到引物的5’端

C．PCR反应过程可以在PCR扩增仪中自动完成

D．PCR的每次循环一般可以分为变性、复性和延伸三步

3 . 实验室常用PCR技术对DNA进行体外扩增，下列相关叙述正确的是（       ）

A．需要耐高温的DNA聚合酶和DNA连接酶

B．反应过程包括变性→复性→延伸

C．90℃时DNA的磷酸二酯键断开

D．引物与模板结合后向5′方向延伸

4 . 下列关于“DNA片段的扩增及电泳鉴定”的实验，说法错误的是（       ）

A．PCR利用了DNA的热变性原理，通过调节温度来控制

B．PCR的产物一般要通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定

C．凝胶中DNA分子的迁移速率只与DNA分子的大小有关

D．为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的工具也需要灭菌处理

5 . 四尾栅藻生长周期短、适应性强，是一种高潜力生物柴油新型原料，但油脂产量低。研究人员从含油量高的紫苏中提取DGATl（催化油脂合成的关键酶）基因，并成功导入四尾栅藻细胞内，获得转基因的产油四尾栅藻。其制备流程如图，图中Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因，LacZ基因可使细菌分解培养基中的物质X-gal，进而使菌落呈现蓝色，无该基因或该基因被破坏，菌落呈白色。回答下列问题：

(1)从高表达的紫苏组织细胞中提取总的RNA，经_________获得cDNA，用于PCR扩增，PCR扩增DGATl基因时，使反应体系中的模板cDNA解旋为单链的条件是__________________。
(2)在DNA延伸的过程中，使用Taq DNA聚合酶而不使用大肠杆菌DNA聚合酶的主要原因是_____。
(3)构建的pMD19-DGATl导入经CaCl₂溶液处理的感受态大肠杆菌细胞中，并通过稀释涂布平板法接种到含_________的培养基中培养。一段时间后，挑选_________色的菌落以提取质粒pMD19-DGATl。
(4)用限制酶BamH I和Xba I切割pMD19-DGATl和pBI121，将其连接成重组表达载体pBI121-DGATl， 并将其导入四尾栅藻细胞中。与单酶切相比，双酶切的优点是________。

6 . 体外条件下，DNA复制需要有引物。下列叙述错误的是（       ）

A．用于PCR扩增的引物的长度通常为20～30个核苷酸

B．引物制备的前提是已知目的基因的部分脱氧核苷酸序列

C．进行体外DNA复制时，引物要有两种且不能互补配对

D．脱氧核苷酸作为扩增的原料会依次连接到引物的5′端

7 . 土壤盐渍化影响水稻生长发育，将水稻耐盐碱基因OsMYB56导入不耐盐碱水稻品种吉粳88中，培育耐盐碱水稻新品种，其操作流程及可能用到的限制酶如图，其中bar为抗除草剂基因，Tet^r为四环素抗性基因，Amp^r为氨苄青霉素抗性基因，①~⑦表示操作过程。

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	SmaⅠ	Sau3AⅠ
识别位点及切割位点	-G↓GATCC-	-T↓GATCA-	-CCC↓GGG-	-↓GATC-

(1)OsMYB56基因游离的磷酸基团侧为__________（“5'”或“3'”）端，过程①PCR扩增OsMYB56基因时加入的酶催化__________键的形成，还需要添加引物，应选用引物组合__________。
①5'-CTTGGATGAT-3'             ②5'-TAAGTTGTCT-3'             ③5'-TAGTAGGTTC-3'
④5'-TCTGTTGAAT-3'             ⑤5'-ATTCAACAGA-3'             ⑥5'-ATCATCCAAG-3'
(2)根据基因表达载体的结构组成分析，Ti质粒中的CaMV35S是___________，其功能是___________。基因表达载体中，OsMYB56基因和bar基因编码链的方向___________（填“相同”或“相反”）。
(3)过程③应选用限制酶__________切割质粒，利用所选限制酶进行操作的优势是__________，切割后需要用___________进行连接才能获得重组质粒。
(4)为了筛选出含重组质粒的受体细胞，④过程应在添加___________的选择培养基上培养。培养后获得的菌落不能判定是否含有重组质粒，原因是___________。

8 . 红细胞生成素（EPO）是人体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然 EPO来源极为有限，某科研团队采用基因工程培育转基因羊作为乳腺生物反应器，使其能合成EPO。下列有关叙述错误的是（       ）

A．构建表达载体时需将EPO基因插入乳腺蛋白基因的启动子的上游

B．一般情况下，该转基因羊中的EPO基因只在羊的乳腺细胞中表达

C．可用显微注射技术将含有EPO基因的表达载体导入羊的受精卵中

D．用PCR扩增人EPO基因，需要一段已知的EPO基因核苷酸序列

9 . 我国有大面积的沿海滩涂和盐碱地，利用生物技术培育出耐盐农作物，可以合理利用这些沿海滩涂和盐碱地，以此增大我国的人均可用耕地面积。如图表示构建基因表达载体所用到的外源DNA和质粒，其中箭头指向是限制酶识别的核苷酸序列所在位置。另外；BamH I、Sma I和Hind Ⅲ三种限制酶切割DNA时形成的末端均不同。请回答下列问题。

(1)获得的耐盐基因在细胞外进行扩增时，常采用的技术是____________。该技术用到的酶与普通的胞内酶相比，最大的特点是____________。
(2)构建该重组质粒时，图中不能使用的限制酶是____________，理由是________________________。
(3)重组表达载体除了含有目的基因和图中标出的结构外，还必须有____________、____________，其中后者具有____________酶识别和结合的位点。
(4)设计一个实验，从细胞水平上鉴定受体细胞内是否成功导入该重组质粒，请写出简要实验思路： __________

10 . 研究人员发现，有一种称作XRCC2的启动子（负责RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列）在正常细胞中表达水平很低，而在癌细胞中却高表达。利用该特性，研究人员结合DTA（白喉毒素A基因，其表达产物能够杀死细胞）做了如下图1实验。回答下列问题：

(1)组成XRCC2启动子的基本单位是_____。图2所示为XRCC2启动子两端的部分序列，通过PCR扩增XRCC2启动子，需要设计的两种引物的碱基序列为_____、_____（标明5'和3'端）。
(2)为了成功构建能够特异性杀死肿瘤细胞的质粒，需要先将XRCC2启动子与DTA形成融合基因。请结合图1简述构建融合基因的过程：_____。
(3)要验证重组质粒的表达产物能专一性杀死癌细胞，还需要设置一组对照实验，具体的实验方案为_____。
(4)基因驱动是指特定基因有偏向性地遗传给下一代的自然现象。遗传学家研究发现，基因驱动技术几乎可以百分之百地使突变基因在同一生物的不同种群个体之间传播，某些生物学家曾提出把这种技术应用于消灭一些入侵物种，从而保护那些濒危物种，一些遗传学家立即呼吁增强这种技术的管制。请从生物技术安全性的角度简要谈谈你对该技术的看法：_____。