1 . 传统的PCR反应体系中各成分一次性加入并进入循环，在反应温度由室温（25℃）上升至高温（90℃）过程中，可能发生引物与模板中的非靶位点错配，在热稳定的DNA聚合酶的作用下延伸，形成非特异性产物。热启动PCR可优化目标扩增产物，方法之一是先将除DNA聚合酶以外的各成分混合后，加热到70℃以上，再混入酶，然后启动PCR扩增。下列说法错误的是（       ）

A．非特异性产物可能会在以后的循环中继续扩增

B．热启动PCR可减少非特异性产物的形成

C．模板DNA双链解聚前不会与引物结合

D．PCR反应中温度的周期性变化会引起DNA聚合酶结构的周期性改变

2 . 蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，如图为蛛丝蛋白基因对应的DNA片段结构示意图，其中1-4表示DNA上引物可能结合的位置，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。下列有关叙述正确的是（       ）

A．若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，会破坏4个磷酸二酯键

B．若受体细胞为大肠杆菌，则需先用Ca2+处理，更利于实现转化

C．若用PCR技术获取目的基因，则图中的1、4分别是2种引物结合的位置

D．在PCR仪中根据选定的引物至少需经过6次循环才可获得32个符合要求的目的基因

3 . 甲型流感病毒的抗原性与感染性与其表面的R蛋白（血凝素蛋白）密切相关，现利用基因工程的方法生产相关疫苗。图甲为构建R蛋白基因表达载体的过程，图乙为重组质粒被相关酶切后的电泳结果。下列相关叙述错误的是（　　）

A．电泳技术可以用于人类亲子鉴定、生物间亲缘关系的鉴定

B．图甲过程中至少需要应用到逆转录酶、限制酶、DNA连接酶，DNA聚合酶

C．通过PCR技术从1个cDNA分子中特异性扩增出R蛋白基因时，在第四轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的R蛋白基因

D．构建好的重组质粒长度共2000bp，据图乙可推测BamHⅠ在重组质粒上有3个酶切位点

4 . 传统的基因测序往往需要从大量细胞中提取DNA。科研人员应用单细胞基因组扩增技术，成功地在体外对分离得到的极体进行了基因组扩增（PCR），并完成了测序，从而推测出与被测极体同时产生的卵细胞不含致病基因，最终借助试管婴儿技术帮助女性遗传病患者获得健康婴儿，试管婴儿技术涉及体外受精、胚胎移植等技术。下列有关叙述，正确的是（　　）

A．被测极体的单细胞基因组只包含一个染色体组上的基因

B．体外扩增DNA需要引物，体内DNA复制不需要引物

C．精子获能指精子在获能液中获得ATP后才具备受精能力

D．PCR反应缓冲溶液中要添加Mg2+、耐高温的DNA解旋酶

5 . 光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在棉花种质资源创制中的利用价值，研究人员将A基因转入到棉花中，利用对棉花受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒与含光敏色素基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图甲、乙所示，电泳检测结果如图丙。下列相关叙述错误的是（       ）

A．操作过程中需要用到的工具有限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体

B．构建表达载体时应选用BamHI和HindⅢ这两种限制酶

C．PCR反应过程中每次循环都要经历目的各不相同的两次升温和一次降温

D．由图丙电泳结果可知，1、2、3、4号转基因棉花均培育成功

6 . RDX是一种弹药使用后残留的危险污染物。研究人员将两个源于细菌的RDX 降解酶基因 XplA 和 XplB 插入柳枝稷草染色体中，如图所示，使柳枝稷草获得降解实弹射击场土壤中RDX的能力。若要通过PCR检测所获转基因柳枝稷草中是否含有正确插入的XplA 和 XplB 基因，应选择的引物组合是（　　）

   

A．引物 1+引物3

B．引物 1+引物4

C．引物2 +引物3

D．引物2+引物4

7 . 人胰岛素基因表达的最初产物是一条肽链构成的前胰岛素原，经加工后形成两条肽链（A链和B链）的有生物活性的胰岛素。此后科学家又提出了利用基因工程改造大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法：“AB”法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段，利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素；“BCA”法是利用人体某细胞中的mRNA得到胰岛素基因，表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段。这两种方法使用同一种质粒作为载体。请据下图分析并回答下列问题：

   

(1)由于_______，“AB”法中人工合成的两种DNA片段均有多种可能的序列。“BCA”法是利用人体_______细胞中的mRNA，再由mRNA经________得到的胰岛素基因，________（填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子。
(2)如图是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接，在设计PCR引物时可添加限制酶_________的识别序列，PCR引物应该添加在识别序列的_______（填“3’或5’）端。通过上述方法获得人的胰岛素基因后，需要通过PCR技术进行扩增，若计划用1个胰岛素基因为模板获得m（m大于2）个胰岛素基因，则消耗的引物总量是______个。引物序列中的的GC含量越高，对PCR过程中的_______步骤〔写出具体过程）影响最大，越_______（填“有利于”或“不利于”）目标DNA的扩增。
(3)PCR扩增的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，下列叙述中正确的有______。

A．PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在退火过程起作用

B．待测样品中DNA分子的大小和构象、凝胶浓度等都会影响DNA在电泳中的迁移速率

C．进行电泳时，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动

D．琼脂糖溶液中加入的核酸染料利于DNA在紫外灯下被检测

(4)β-半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色。经________（处理方法）大肠杆菌后，与重组质粒混合培养一段时间，将大肠杆茵接种到添加了________和X-gal的培养基上筛选出_______色的菌落即为工程菌种。

8 . 原位PCR技术是利用原位PCR仪，在组织或细胞中靶DNA所在的位置上进行的PCR循环扩增，通过掺入标记基因直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。进行扩增时，反应体系中的反应成分需渗透到组织或细胞的靶DNA处才能进行扩增。PCR反应体系中需要添加一定浓度的Mg²⁺，而组织细胞间的物质会吸附Mg²⁺，使进入细胞的Mg²⁺减少。下列说法正确的是（       ）

A．PCR技术中复性是当温度下降到65℃时，两种引物与两条DNA单链结合的过程

B．反应体系中扩增的原料会依次连接到子链的5端

C．反应体系中引物的G，C碱基含量越高越好，因为越高引物结合的特异性越强

D．原位PCR反应体系中使用的Mg2+浓度要比常规PCR高

9 . 干扰素是动物或人体细胞受到病毒侵染后产生的一种糖蛋白，它是一种抗病毒的特效药。“中国干扰素之父”侯云德院士利用基因工程的方法获得了人干扰素α-1b，用于临床疾病的治疗。回答下列相关问题。
(1)获得基因工程用的干扰素基因，需先从T淋巴细胞的细胞质中获得___________，经逆转录获得cDNA，再利用___________技术扩增干扰素基因，扩增干扰素基因的前提是要有一段已知目的基因的___________，以便合成引物。
(2)利用山羊乳腺生物反应器来生产干扰素时，要将改造后的人干扰素基因与山羊乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，目的是___________。然后将基因表达载体导入山羊的（填“受精卵”或“乳腺细胞”）中。____________________________
(3)有人尝试让植物细胞产生干扰素，经探索发现水稻胚乳细胞作为反应器的效果比较好。在用农杆菌Ti质粒构建基因表达载体时，应将干扰素基因插入T-DNA片段________________（填“内”或“外”），Ti质粒上的T-DNA的作用是________________。检测水稻胚乳细胞中干扰素基因是否成功表达可采用的方法是。___________________________

10 . 在基因工程中，构建基因表达载体时工具酶的作用部位以及PCR扩增DNA时90摄氏度高温的作用部位是（       ）
   

A．a

B．b

C．c

D．d