1 . 日前,微博传言单位面积上手机细菌比马桶多。如下图所示,央视和北京卫视通过实验展示调查结果。回答下列相关问题:

(1)该实验需制备培养基,培养基一般都含有水、碳源、________。
(2)据图,两电视台均采用____法接种,该方法需要____。
A.接种环　　　　B.酒精灯　　　　C.移液管　　　　D.涂布器　　　　E.无菌水
(3)通过观察菌落的____,可知手机屏幕和马桶按钮都存在多种微生物。两家电视台实验操作均正确且完全一致,但报道结果截然不同,你认为原因是什么?__________________。
(4)按图操作取样面积,实验员测定某手机屏幕的细菌数量,将10 mL菌悬液进行梯度稀释,分别取0.1 mL稀释倍数为10²的样品液接种到三个培养基上,培养一段时间后,统计菌落数分别为48、50、52,则该手机屏幕的细菌数为____个/平方厘米 。该实验对照组该如何设置?____________。

2 . (一）为从养猪场周围土壤中分离产脲酶的微生物，进行了如下实验。

（1）培养基的制备：本实验需在LB固体培养基和尿素固体培养基上进行接种，因尿素_____________，只能用_____________过滤。下列对本实验选用的尿素固体培养基和LB固体培养基的叙述，错误的是( )
A.都要进行高压蒸汽灭菌   B.都含有N源   C.都要添加琼脂糖   D.都要添加酚红指示剂
（2）制备细菌悬液：在无菌条件下，将土样加到含有适量____________的三角瓶中，振荡摇匀，并以此方法制备不同浓度的土壤稀释液。
（3）接种：本实验采用的接种方法是____________。
(二）某研究小组利用下图所示的现代生物科学技术生产药用蛋白一一人组织纤溶酶原激活物（htPA)。请回答：

（1）构建重组表达载体时，通常用_____________切割htPA基因与载体，形成________，再通过DNA连接酶连接。
（2）为获取更多的实验用受精卵，要对供卵母羊注射相应激素，使其________________，获得较多的卵母细胞。采集的精子需要经过________________处理，才具备受精能力。
（3）若想获得更多转htPA基因母羊，还可以对含有htPA基因的胚胎进行________________。       然后再通过________________技术可获得较多后代。
（4）下列有关基因工程的叙述，正确的是( )
A.载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达
B.大肠杆菌质粒是基因工程最常用的载体
C.若目的基因的序列是未知的，可选用PCR技术扩增目的基因
D.DNA连接酶催化形成氢键和磷酸二酯键的形成

3 . （一)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：
(1)无菌操作是微生物实验中重要的一项技术，下列常用的无菌操作中错误的是(     )
A.用酒精擦拭双手
B.用氯气消毒水源
C.实验操作应在酒精灯火焰附近进行
D.玻璃器皿（吸管、培养皿）可用酒精擦拭
(2)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_______为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于__________培养基。
(3)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即__________和_______。
(4)为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力____________。
(二)为了更好地分解石油，通过基因工程产生超级细菌。下图a表示基因工程中经常选用的载体——pBR322质粒,Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因,Tet^r表示四环素抗性基因。目的基因如果插入某抗性基因中，将使该基因失活，而不再具有相应的抗性。为了检查载体是否导入原本没有Amp^r和Tet^r的大肠杆菌(受体细胞），将大肠杆菌涂布在含氨苄青霉素的培养基上培养,得到如图b的结果(黑点表示菌落）。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含四环素的培养基上培养，得到如图c的结果（空圈表示与b对照无菌落的位置）。据此分析并回答：

(1)将重组的DNA分子导入受体细胞时，用________处理大肠杆菌，增大____________。
(2)pBR322质粒的化学本质是_______，其控制着__________等性状。与图c空圏相对应的图b中的菌落表现型是___________，由此说明目的基因插入了_____________中。
(3)基因工程成功的标志是_______________________。

4 . 回答下列(一)、(二)小题：
(一)泡菜是人们喜爱的食品，但在腌制的过程中会产生一定量的亚硝酸盐，危害人们的健康。研究人员检测了不同浓度的食盐、不同发酵阶段的泡菜中的亚硝酸盐含量，结果如下图所示。

请回答：
(1)制作泡菜时如希望发酵快一些，可将蔬菜放在______中浸泡1分钟后入坛。发酵坛中还可加一些白酒，加白酒的目的是增加醇香感和____________。
(2)据图分析，下列叙述错误的是( )
A．腌制泡菜的最佳食盐用量约为5%
B．过多的食盐可能会抑制发酵作用
C．腌制初期泡菜的亚硝酸盐含量上升
D．食用泡菜最安全的是腌制后3～9天
(3)在利用光电比色法测定泡菜亚硝酸盐含量时，在样品溶液中加入显色剂会生成________色产物。绘制标准曲线时，可以亚硝酸钠的质量为横坐标，以______________为纵坐标。对样品和标准溶液的测定中，要用光程相同的________。
(二)我国目前临床使用的乙肝疫苗大多为基因工程疫苗，其有效成分是一种叫做乙肝表面抗原的蛋白质(S蛋白)，对应的基因为s基因。请回答：
(1)在构建重组DNA分子时，要用限制性核酸内切酶处理____________，并用____________酶使两者结合。将重组DNA分子导入到哺乳动物细胞，经筛选得到工程细胞。
(2)在细胞培养过程中，工程细胞在生长过程中有______现象，需要定期使用________酶处理，以便于分瓶培养。
(3)为提高工程细胞培养的成功率，下列措施中不能采用的是( )
A．取单个细胞进行培养
B．加入胰岛素
C．二氧化碳培养箱
D．加入动物血清
(4)由于哺乳动物细胞培养较难，成本较高，近些年科学家们又发明了“乳腺生物发生器”，进而从转基因动物的乳汁中提取所需产品。在这种技术中，作为重组DNA分子受体细胞的一般是________。

5 . 回答下列(一)(二)小题：
(一)在农村，泡菜的制作方法是：先对新鲜的蔬菜进行整理、清洁，然后放入彻底清洗并用白酒擦过的泡菜坛中，再向坛中加入盐水、香辛料及一些“陈泡菜水”。密封后置于阴凉处，适宜环境温度为28～30 ℃。请回答：
(1)用白酒擦拭泡菜坛的目的是________。
(2)此过程中起主要作用的微生物是________(A.乳酸菌＋假丝酵母　B．乳酸菌＋醋化醋杆菌　C．酵母菌＋霉菌　D．酵母菌＋醋化醋杆菌)，这些微生物利用蔬菜中的糖类和其他物质进行发酵，产物有____________等，其中也包括亚硝酸。
(3)某同学想测定制作的泡菜中亚硝酸盐的含量，需要先用亚硝酸钠标准溶液绘制______________，再通过测定泡菜匀浆的______________进行计算。
(4)若要获得优良乳酸菌菌种，纯化菌种时，更易分离得到单菌落的接种方法是________________，培养时还需提供________条件。
(二)干扰素是抗病毒的特效药，干扰素基因缺失的个体，免疫力严重下降。科学家设计了以下流程，利用胚胎干细胞(ES细胞)对干扰素基因缺失的患者进行基因治疗。请回答：

(1)上图中进行的是________(填“体内”或“体外”)基因治疗，①过程中利用的生物工程技术手段称为________。若导入的干扰素基因序列为已知，则可通过________获取。
(2)ES细胞是由囊胚中的____________分离出来的一类细胞，具有____________性，可以将其培养成人体各种组织器官。在培养过程中常被用作饲养层细胞的一般是________________________。
(3)下列关于上述操作中的叙述，正确的是________。
A．①②操作体现了上皮细胞具有全能性
B．③过程可以用农杆菌转化法进行基因导入
C．完成基因导入的细胞就具有了合成并分泌干扰素的能力
D．基因治疗依据的变异原理是基因重组

6 . 有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如下图甲、乙所示。

（1）微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、_________四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_________________。
（2）与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和_______，这些植物激素一般需要事先单独配置成_____保存备用。
（3）纯化菌株时，通常使用的划线工具是_______。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_______________，__________________。
（4）为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是___________________________________________________________________，该实验设计是否合理？为什么？_________________________________________________________________________________。

7 . 榨制果汁时用到果胶酶，而果胶酶可在霉菌、酵母菌及细菌中提取。回答下列有关问题：
（1）果胶酶并不特指某一种酶，而是指分解果胶的一类酶的总称，包括_________________________（至少写出两种）
（2）榨制果汁前，要将果胶酶与果泥混匀保温，目的是______________________；过滤后要用果胶酶处理果汁，目的是_______________________________________。
（3）若既考虑缩短反应时间，又考虑成本，使用果胶酶时，除了控制好温度、pH等外界环境条件，还应该掌握好______________。
（4）若想分离出含有高活性果胶酶的优质酵母菌，需进行酵母菌的纯化。
①配制培养基时，除需提供水、无机盐等主要的营养物质外，培养基还需满足微生物生长对__________及特殊营养物质的需求。为筛选含有高活性果胶酶的优质酵母菌，应该用_______________作唯一碳源。
②为纯化酵母菌，需要在______培养基上接种菌种。最常用的接种方法有____________________。

8 . 生物技术的迅速发展，给社会带来了巨大的经济效益，受到社会的广泛重视，请回答下列生物技术方面的问题：
(1)天然植物色素对人体健康没有危害，作为添加剂大大丰富了人们的生活。实验室提取植物色素常用的方法是__________法；植物芳香油主要通过__________法获得。
(2)纤维素可用来生产乙醇燃料，有些微生物能合成___________________分解纤维素，从土壤中分离此类微生物时需向培养基中加入纤维素粉作为______________________，这种培养基属于______________ 。
(3)在制备固定化酵母细胞的过程中，溶化好的海藻酸钠溶液要冷却至室温，才能加入已活化的酵母菌，目的是_________________________ 。如果在CaCl₂溶液中形成的凝胶珠颜色过浅，说明 _______________ 。
(4)微生物培养过程中，获得纯培养物的关键是__________________________，其中对培养皿进行灭菌常用的方法是_________________________。