1 . 将野生型谷氨酸棒状杆菌利用同源重组（将外源目的基因与受体的同源序列交换）的方法敲除葡萄糖转运系统关键酶基因ptsG，可以实现葡萄糖转运阻断，为分子水平研究葡萄糖转运提供参考。ptsG基因敲除质粒构建过程如图1所示，其中KanR是抗生素抗性基因，SacB是将蔗糖转变为果聚糖的基因，果聚糖积累对细菌有毒害，XhoI、EcoRI的识别序列和切割位点分别是—C↓TCGAG—、—G↓AATTC—。据此回答下列问题：

   

(1)图1中利用PCR获得上同源臂或下同源臂区段至少需要扩增_________轮。从引物角度分析，扩增得到上、下同源臂能拼接到一起的关键是_________。ptsG基因敲除质粒构建过程中，选用XhoI和EcoRI双酶切的优点是_________。
(2)将敲除ptsG基因质粒导入工程菌中能实现扩增。在工程菌筛选时，可分别接种到含卡那霉素培养基、含10%蔗糖培养基，_________（填“仅能在含卡那霉素”“仅能在含10%蔗糖”或“两种”）培养基上生长的为目的菌。
(3)将筛选得到的敲除ptsG基因质粒导入野生型容氨酸棒状杆菌，通过两次同源重组可敲除ptsG基因（如图2）。
①两次同源重组共有_________个磷酸二酯键的断裂（或合成）。验证同源重组是否成功，可以设计特定的引物进行PCR，通常将扩增产物利用_________方法鉴定。
②若从细胞水平上证明谷氨酸棒状杆菌的ptsG基因敲除成功，还需要将该菌和野生型谷氨酸棒状杆菌分别培养在以葡萄糖为唯一碳源的_________培养基上，该菌对葡萄糖的利用率明显比野生型菌_________。

2 . 未吃完的西瓜进行冷藏时是否需要用保鲜膜包裹，曾引发热议。某生物小组进行了相关探究实验：将一个西瓜切成两半，一半包裹保鲜膜，另一半不包裹保鲜膜，均放入冰箱冷藏12小时，取出后制成西瓜汁。各取1mL西瓜汁加入9mL无菌水中制备样液，经稀释后，分别取0.1mL稀释液涂布于多个平板上培养，选择符合要求的平板计数并统计，结果如下表所示。下列有关分析错误的是（       ）

处理方式	包裹保鲜膜冷藏	不包裹保鲜膜冷藏
菌落数（个/mL）	2.4×106	1.3×106

A．实验所用培养基可用紫外线照射30min进行灭菌

B．将蘸有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽冷却后接种

C．表中实验数据是将制备的样液再稀释1×102倍后涂布培养获得的

D．若使用细菌计数板计数，则获得的实验数据可能大于表中的实验结果